rTrypsin的應(yīng)用
• 包括干細胞在內(nèi)的多種細胞系的細胞解離和增殖
• 疫苗生產(chǎn)加工
• 在細胞固定和分選之前分離切割的細胞•
rTrypsin的優(yōu)點
• 通過重組生產(chǎn)工藝生產(chǎn)的胰蛋白酶不受動物酶如胰凝乳蛋白酶或羧肽酶的污染。
• 無動物來源（AOF）生產(chǎn)工藝消除了最終產(chǎn)品中病毒和動物相關(guān)污染物的風(fēng)險
• 允許簡單替換?；蜇i胰蛋白酶
• 穩(wěn)定性不受Ca2+的影響• 穩(wěn)定一致的供應(yīng)
rTrypsin穩(wěn)定性
• rTrypsin是一種顆粒狀產(chǎn)品
• rTrypsin的特殊穩(wěn)定性使得在細胞培養(yǎng)過程中酶的儲存和常規(guī)處理變得容易和方便
rTrypsin專一性rTrypsin像天然胰蛋白酶一樣在賴氨酸和精氨酸的羧基側(cè)切割肽鍵。這代表rTrypsin可以簡單地替代豬或牛胰蛋白酶rTrypsin 酶特異性在pH 9.0 （Suc-AAPX-pNA）
底物：Suc-AAPA-PNA，Suc-AAPR-PNA，Suc-AAPD-PNA、Suc-AAPIPNA、Suc-aapm-PNA，Suc AAPV-PNA，Suc AAPL-PNA，SucA-APEPNA，SucA-APK-PNA，Suca-AAPF-PNA.
測定緩沖液：100mM琥珀酸，100mM HEPES，100mM CHES，100mMCABS，1mM CaCl2，150mM KCl，0.01%Triton X-100，pH9.0。
測定：20μ 重組胰蛋白酶/豬胰蛋白酶（在0.01%Triton X-100中稀釋）與100μl測定緩沖液在微量滴定板孔中混合。
通過加入100μl PNA底物（50mg PNA底物溶解在1.0ml DMSO中，并進一步用0.01%Triton X-100稀釋45倍）開始測定。監(jiān)測OD405的增加作為胰蛋白酶/豬胰蛋白酶活性的量度
rTrypsin用于分離細胞胰蛋白酶可用于來自粘附于培養(yǎng)容器內(nèi)表面生長的單層的細胞。rTrypsin在干細胞系如IPH和HES以及CHO、Vero和MDCK細胞系上表現(xiàn)良好。最常見的方法是用胰蛋白酶/EDTA/PBS緩沖液（調(diào)節(jié)至pH 7）處理，將細胞從培養(yǎng)基質(zhì)中去除。根據(jù)細胞系的不同，建議的rTrypsin濃度應(yīng)調(diào)節(jié)至0.2 mg/mL（相當(dāng)于200 U/mL活性為1000 USP/mg粉末的rTrypsin），并進行無菌過濾。
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