人肝星形細(xì)胞

　lx-2人肝星形細(xì)胞

一．細(xì)胞簡(jiǎn)介：

　　細(xì)胞名稱：lx-2人肝星形細(xì)胞

　　平臺(tái)編號(hào):zl-056855

　　細(xì)胞介紹

　　該細(xì)胞系由發(fā)表該細(xì)胞文章的作者命名，這個(gè)細(xì)胞又叫LiemingXu-2，這是一個(gè)永生化的細(xì)胞。

　　細(xì)胞特性

　　1）來(lái)源：肝

　　2）形態(tài)：星狀細(xì)胞，貼壁生長(zhǎng)

　　3）含量：>1x106細(xì)胞數(shù)

　　4）規(guī)格：T25瓶或者1mL凍存管包裝

　　5)用途：僅供科研使用。

　　二．　lx-2人肝星形細(xì)胞細(xì)胞的培養(yǎng)：

　　1）準(zhǔn)備1640培養(yǎng)基；優(yōu)質(zhì)胎牛血清，10%；雙抗，1%。

　　2）培養(yǎng)條件：氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。溫度：37℃，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。

　　3）凍存液：90%血清，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配。

　　三．　lx-2人肝星形細(xì)胞細(xì)胞處理：

　　1）凍存細(xì)胞的復(fù)蘇：

　　將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍，加入到含4-6mL*培養(yǎng)基的離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心3-5min，棄去上清液，*培養(yǎng)基重懸細(xì)胞。然后將細(xì)胞懸液加入含6-8ml*培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶（或皿）中37℃培養(yǎng)過(guò)夜。第二天顯微鏡下觀察細(xì)胞生長(zhǎng)情況和細(xì)胞密度。

　　2）細(xì)胞傳代：如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。

　　對(duì)于貼壁細(xì)胞傳代可以參考以下方法：

　　1.棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤(rùn)洗細(xì)胞1-2次。

　　2.加入0.25％（w/v）胰蛋白酶-0.53mMEDTA于培養(yǎng)瓶中（T25瓶1-2mL，T75瓶2-3mL），置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘（難消化的細(xì)胞可以適當(dāng)延長(zhǎng)消化時(shí)間），然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況，若細(xì)胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺(tái)，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加入3-4ml含10%FBS的培養(yǎng)基來(lái)終止消化。

　　3.輕輕打勻后吸出，在1000RPM條件下離心3-5min，棄去上清液，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻。將細(xì)胞懸液按1：2的比例分到新T25瓶中，添加6-8ml按照說(shuō)明書要求配置的新的*培養(yǎng)基以保持細(xì)胞的生長(zhǎng)活力，后續(xù)傳代根據(jù)實(shí)際情況按1:2~1:5的比例進(jìn)行。

　　3）細(xì)胞凍存:收到細(xì)胞后建議在培養(yǎng)前3代時(shí)凍存一批細(xì)胞種子以備后續(xù)實(shí)驗(yàn)使用。

　　下面T25瓶為例；

　　1.細(xì)胞凍存時(shí)按照細(xì)胞傳代的過(guò)程收集消化好的細(xì)胞到離心管中，可使用血球計(jì)數(shù)板計(jì)數(shù)，來(lái)決定細(xì)胞的凍存密度。一般細(xì)胞的推薦凍存密度為1×106~1×107個(gè)活細(xì)胞/ml.

　　2.1000rpm離心3-5min，去掉上清。用配制好的細(xì)胞凍存液重懸細(xì)胞，按每1ml凍存液含1×106~1×107個(gè)活細(xì)胞/ml分配到一個(gè)凍存管中將細(xì)胞分配到凍存管中，標(biāo)注好名稱、代數(shù)、日期等信息。

　　3.將要凍存的細(xì)胞置于程序降溫盒中，-80度冰箱中過(guò)夜，之后轉(zhuǎn)入液氮容器中儲(chǔ)存。同時(shí)記錄好凍存管在液氮容器中的位置以便后續(xù)查閱和使用。

　　四、運(yùn)輸和保存

　　干冰運(yùn)輸及復(fù)蘇好存活細(xì)胞

　?。?）1mL凍存管包裝干冰運(yùn)輸，收到后-80度冰箱保存過(guò)夜后轉(zhuǎn)入液氮或直接復(fù)蘇，若發(fā)現(xiàn)干冰已揮發(fā)干凈、凍存管瓶蓋脫落、破損及細(xì)胞有污染，請(qǐng)立即與我們聯(lián)系。

　?。?）T25瓶復(fù)蘇的存活細(xì)胞常溫發(fā)貨，收到后按照細(xì)胞接收后的處理方法操作。

　　五、細(xì)胞接收后的處理

　　1）收到細(xì)胞后，75%酒精消毒瓶壁將T25瓶置于37℃培養(yǎng)箱放置約2-3h，若發(fā)現(xiàn)培養(yǎng)瓶破損、有液溢出及細(xì)胞有污染，請(qǐng)拍照后及時(shí)聯(lián)系質(zhì)粒載體網(wǎng)。

　　2）請(qǐng)?jiān)?或5X顯微鏡下確認(rèn)細(xì)胞狀態(tài)，同時(shí)給剛收到的細(xì)胞拍照（10×，20×）各2-3張以及培養(yǎng)瓶外觀照片一張留存，作為售后時(shí)收到時(shí)細(xì)胞狀態(tài)的依據(jù)。

　　3）貼壁細(xì)胞：細(xì)胞在37℃培養(yǎng)箱中放置2-3h，顯微鏡下觀察細(xì)胞的生長(zhǎng)和貼壁情況，有些貼壁細(xì)胞在快遞運(yùn)送過(guò)程中會(huì)因振動(dòng)脫落和脫落后成團(tuán)的情況。若鏡下觀察細(xì)胞的生長(zhǎng)密度若在60%以下，可去除培養(yǎng)瓶中灌液培養(yǎng)基（若有未貼壁的細(xì)胞需要離心回收，重懸打入到原培養(yǎng)瓶中）,加入新配制的*培養(yǎng)基6-8mL，放到細(xì)胞培養(yǎng)箱中繼續(xù)培養(yǎng)。若細(xì)胞生長(zhǎng)密度達(dá)70%-80%以上，可以對(duì)細(xì)胞進(jìn)行傳代處理。傳代過(guò)程中，若因運(yùn)輸振動(dòng)脫落的細(xì)胞需要離心回收。

　　4）備注：運(yùn)輸用的培養(yǎng)基（灌液培養(yǎng)基）不能再用來(lái)培養(yǎng)細(xì)胞，請(qǐng)換用按照說(shuō)明書細(xì)胞培養(yǎng)條件新配制的*培養(yǎng)基來(lái)培養(yǎng)細(xì)胞。收到細(xì)胞后傳代建議T25培養(yǎng)瓶1：2傳代。

　　智立中特（武漢）生物科技有限公司是一家集生物研發(fā)，生產(chǎn)，銷售，售后為一體的*產(chǎn)業(yè)公司。擁有載體質(zhì)粒，載體，國(guó)內(nèi)外微生物菌種資源，感受態(tài)細(xì)胞，培養(yǎng)基，細(xì)胞株等廣泛的生產(chǎn)銷售線。

　　質(zhì)粒載體產(chǎn)品：

　　提供各種類型載體宿主，基因種屬類型，抗性，設(shè)計(jì)并構(gòu)建質(zhì)粒：大腸桿菌表達(dá)載體；哺乳動(dòng)物表達(dá)載體；酵母表達(dá)載體；昆蟲表達(dá)載體；植物表達(dá)載體；廣;腺病毒載體...常用有pACYC184；pACYCDuet-1；pASK-IBA5plus+FUS(人基因）；pAX01；pBABE-Puro；pBAD24

　　pBI121；pBIFC-bFosVC155；pBIFC-VC15；pCDFDuet-1；pCDH-CMV-MCS-EF1-Puro；pCDH-CMV-MCS-EF1-CopGFP-T2A-puro；pBIFC-VN155(I152L)addgene27097；pCDH-MSCV-MCS-EF1-copGFP-T2A-Puro；pCAGGS；pBiFC-VN173(Plasmid#22010)；pBlueScriptSK(+)；pBlueScriptIISK(+)；pBV220；pCas；pCas9

　　pBR322；pBT3-STE；pBudCE4.1以及結(jié)合轉(zhuǎn)移質(zhì)粒RP4；pGL4.25[luc2CP/minP];pGR106;pIRES2-AcGFP1-Nuc;psfGFP;pHEN1;pNL1.1[Nluc];pBBR1-GFP；pBMTB-5;pBMTB-4;pBMTB-3;pBMTB-2;pCAMBIA0305.1;pCX-DR;;pGreenII0800-miRNA;pK7GWIWG2(I);pRARE;pDG1663

　　質(zhì)粒菌種產(chǎn)品：

　　E.coliNissle1917；USA300：大腸桿菌JM108；希瓦氏菌屬M(fèi)R-1；E.coliW3110野生型；釀酒酵母W303a；釀酒酵母invsc1；釀酒酵母BY4741；釀酒酵母BY4742；畢赤酵母SMD1168H；PseudomonasputidaKT2440；E.coliMC1061；枯草芽孢桿菌WB800；根癌農(nóng)桿菌EHA105；根癌農(nóng)桿菌GV3101；CEN.PK2-1D；CEN.PK2-1C；全耐藥鮑曼不動(dòng)桿菌；哈維弧菌BB170

　　菌種產(chǎn)品：

　　提供模式菌種，科研菌種，普通菌種等菌種資源，有證質(zhì)控樣品等微生物標(biāo)準(zhǔn)品，芽孢懸液。常用藥典菌種如：大腸埃希氏菌CMCC（B）44102、黑曲霉CMCC（F）98003,白色念珠菌CMCC(F)98001,枯草芽孢桿菌CMCC（B）63501,銅綠假單胞菌CMCC（B）10104,生孢梭菌CMCC（B）64941;常用益生菌：長(zhǎng)雙歧桿菌（Bifidobacteriumlongum）,嗜熱鏈球菌（Streptococcusthermophilus），鼠李糖乳桿菌（Lactobacillusrhamnosus），類干酪乳桿菌（Lactobacillusparacasei），干酪乳桿菌（Lactobacilluscasei）；常用真菌：松口蘑Tricholomamatsutake，灰葡萄孢bio-81601cfcc50437Botrytiscinerea；靈芝，香菇，茯苓等

　　原代細(xì)胞和細(xì)胞系產(chǎn)品：

　　現(xiàn)取不同組織現(xiàn)分：不同來(lái)源人/鼠/兔/豬等不同組織如肺、氣管、支氣管、甲狀腺、胰腺、垂體、腎上腺、扁桃體、胸腺、腎、膀胱、輸尿管、前列腺、心臟、血管。常用原代細(xì)胞有：氣管上皮細(xì)胞；前列腺上皮細(xì)胞；膀胱上皮細(xì)胞；輸尿管上皮細(xì)胞；腎足細(xì)胞；內(nèi)皮祖細(xì)胞；輸卵管上皮細(xì)胞；乳腺上皮細(xì)胞

　　公司提供細(xì)胞系人源做過(guò)STR鑒定，其他做過(guò)種屬鑒定，確保產(chǎn)品無(wú)誤后方可提供客戶，形式凍存或復(fù)蘇節(jié)省客戶時(shí)間；確保實(shí)驗(yàn)順利。常用細(xì)胞系有：WB-F344細(xì)胞；RG2[D74]細(xì)胞；NRK細(xì)胞；A7r5細(xì)胞；L6細(xì)胞；UMNSAH/DF-1細(xì)胞；MDBK(NBL-1)細(xì)胞；MDBK細(xì)胞；CCC-SMC-1細(xì)胞；PtK1(NBL-3)細(xì)胞；Mv1Lu細(xì)胞；Mv.1.Lu(NBL-7)細(xì)胞；F81細(xì)胞；CRFK細(xì)胞；MLTC-1細(xì)胞；MS1細(xì)胞；C3H/10T1/2,Clone8細(xì)胞；GL261細(xì)胞；P3X63Ag8.653細(xì)胞；HCC38細(xì)胞；ZR-75-30細(xì)胞；SK-LU-1細(xì)胞；NCI-H2087細(xì)胞；SK-N-MC細(xì)胞；Hs895.T細(xì)胞