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貨號(hào) | 產(chǎn)品名稱 | 規(guī)格 |
AS632160 | 蛋白質(zhì)羰基測(cè)試盒（比色法） | 100管/48樣 |
AS632160 | 蛋白質(zhì)羰基測(cè)試盒（比色法） | 50管/24樣 |
注意：正式實(shí)驗(yàn)之前選擇2-3個(gè)預(yù)期差異大的樣本做預(yù)測(cè)定。
測(cè)定意義：
蛋白質(zhì)羰基是多種氨基酸在蛋白質(zhì)的氧化修飾過(guò)程中的早期標(biāo)志，其含量高低表明蛋白質(zhì)氧化損傷程度的大小，是衡量蛋白質(zhì)氧化損傷的主要指標(biāo)。
測(cè)定原理：
羰基與2,4-二硝基肼反應(yīng)生成紅色2,4-二硝基腙，在370nm處有特征吸收峰。
自備實(shí)驗(yàn)用品及儀器：
天平、恒溫水浴鍋、低溫離心機(jī)、漩渦震蕩儀、可見(jiàn)分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀、微量石英比色皿/96孔板、蒸餾水、無(wú)水乙醇、乙酸乙酯。
試劑組成和配制：
提取液：液體100mL×1瓶，4℃保存。
試劑一：粉劑0.1g×5支，4℃避光保存。（使用前根據(jù)樣品數(shù)，每支加1mL水溶解，每支為10個(gè)樣品用量）
試劑二：液體6mL×1瓶，4℃避光保存。
試劑三：液體6mL×1瓶，4℃保存。
試劑四：液體15mL×1瓶，4℃保存。
試劑五：根據(jù)測(cè)定樣品量，將乙酸乙酯和無(wú)水乙醇等體積混合。
試劑六：液體60mL×1瓶，4℃保存。
樣品處理：
組織樣品：按照組織質(zhì)量（g）：提取液體積(mL)為1：5~10的比例（建議稱取約0.1g組織，加入1mL提取液）進(jìn)行冰浴勻漿，于4℃，4000g離心10min，取上清，加入0.1mL試劑一，室溫放置10min，4℃，10000g離心10min，取上清待測(cè)。
細(xì)菌、真菌：按照細(xì)胞數(shù)量（104個(gè)）：提取液體積（mL）為500~1000：1的比例（建議500萬(wàn)細(xì)胞加入1mL提取液），冰浴超聲波破碎細(xì)胞（功率300w，超聲3秒，間隔7秒，總時(shí)間3min）；然后10000g，4℃，離心10min，取上清置于冰上待測(cè)。
血清等液體樣本：直接測(cè)定。
測(cè)定步驟和操作表：
分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀預(yù)熱30min，調(diào)節(jié)波長(zhǎng)至370nm。
操作表
對(duì)照管 | 測(cè)定管 | |
樣品（μL） | 60 | 60 |
試劑二（μL） | 120 | |
試劑三（μL） | 120 | |
混勻，37℃避光反應(yīng)1h | ||
試劑四（μL） | 150 | 150 |
靜置5min，4℃，12000g離心15min，棄上清，留沉淀 | ||
試劑五（μL） | 300 | 300 |
漩渦混勻，4℃，12000g離心10min，棄上清，留沉淀 | ||
試劑五（μL） | 300 | 300 |
漩渦混勻，4℃，12000g離心10min，棄上清，留沉淀 | ||
試劑五（μL） | 300 | 300 |
漩渦混勻，4℃，12000g離心10min，棄上清，留沉淀 | ||
試劑六（μL） | 300 | 300 |
漩渦混勻，37℃溫育15min，沉淀全部溶解后，4℃，12000g離心15min，取上清200μL于微量石英比色皿/96孔板中，測(cè)定A370。ΔA=A測(cè)定管-A對(duì)照管 | ||
計(jì)算公式：
a．用微量石英比色皿測(cè)定的計(jì)算公式如下
按照樣本蛋白濃度計(jì)算
蛋白質(zhì)羰基含量（μmol/mg prot）= [ΔA370×V反總÷（ε×d）]÷(V樣×Cpr) =0.227×ΔA370÷Cpr
按照樣本重量計(jì)算
蛋白質(zhì)羰基含量（μmol/g 鮮重）= [ΔA370×V反總÷（ε×d）]÷(W ×V樣÷V樣總) =0.227×ΔA370÷W
3. 按照細(xì)胞數(shù)量計(jì)算
蛋白質(zhì)羰基含量（μmol/104cell）= [ΔA370×V反總÷（ε×d）]÷(細(xì)胞數(shù)量 ×V樣÷V樣總) =0.227×ΔA370÷細(xì)胞數(shù)量
按照液體體積計(jì)算
蛋白質(zhì)羰基含量（μmol/mL）= [ΔA370×V反總÷（ε×d）]÷V樣=0.227×ΔA370
V反總：反應(yīng)體系總體積，0.3 mL；ε：羰基毫摩爾消光系數(shù)，22 L/mmol/cm；d：比色皿光徑，1cm；V樣：加入樣本體積，0.06 mL；V樣總：加入提取液體積，1 mL；Cpr：樣本蛋白質(zhì)濃度，mg/mL，W：樣本質(zhì)量，g
用96孔板測(cè)定的計(jì)算公式如下
1. 按照樣本蛋白濃度計(jì)算
蛋白質(zhì)羰基含量（μmol/mg prot）= [ΔA370×V反總÷（ε×d）]÷(V樣×Cpr) =0.454×ΔA370÷Cpr
2. 按照樣本重量計(jì)算
蛋白質(zhì)羰基含量（μmol/g 鮮重）= [ΔA370×V反總÷（ε×d）]÷(W ×V樣÷V樣總) =0.454×ΔA370÷W
3. 按照細(xì)胞數(shù)量計(jì)算
蛋白質(zhì)羰基含量（μmol/104cell）= [ΔA370×V反總÷（ε×d）]÷(細(xì)胞數(shù)量 ×V樣÷V樣總) =0.454×ΔA370÷細(xì)胞數(shù)量
4. 按照液體體積計(jì)算
蛋白質(zhì)羰基含量（μmol/mL）= [ΔA370×V反總÷（ε×d）]÷V樣=0.454×ΔA370
V反總：反應(yīng)體系總體積，0.3 mL；ε：羰基毫摩爾消光系數(shù)，22 L/mmol/cm；d：96孔板光徑，0.5cm；V樣：加入樣本體積，0.06 mL；V樣總：加入提取液體積，1 mL；Cpr：樣本蛋白質(zhì)濃度，mg/mL，W：樣本質(zhì)量，g
注意事項(xiàng)：
1. 試劑一使用前根據(jù)要測(cè)定的樣品數(shù)現(xiàn)配，配置好后4℃保存，若變?yōu)楹谏?，則不能使用。
2. 試劑二見(jiàn)光易分解，反應(yīng)需嚴(yán)格避光。
公司正在出售的產(chǎn)品：
TCR ELISA Kit | Ⅰ類(lèi)主要組織相容性復(fù)合體GELISA試劑盒 |
anti-HCV ELISA Kit | Bcl2樣蛋白11ELISA試劑盒 |
Aprataxin蛋白ELISA試劑盒 | CD276分子ELISA試劑盒 |
Calicin蛋白ELISA試劑盒 | DNA指導(dǎo)聚合meiγ1ELISA試劑盒 |
大鼠可溶性白介su6受體(sIL-6R)ELISA Kit | 大鼠S100B蛋白(S-100B)ELISA檢測(cè)試劑盒 |
血小板反應(yīng)蛋白解整合su金屬肽mei4ELISA試劑盒 | 雞肌紅蛋白(MYO/MB)試劑盒ELISA |
人P鈣黏蛋白/胎盤(pán)鈣黏蛋白(P-cad)ELISA檢測(cè)試劑盒 | CopineⅤ蛋白ELISA試劑盒 |
豬抗凝血mei受體(ATR)ELISA試劑盒 | 口蹄疫病毒通用RT-PCR試劑盒 |
龜分枝桿菌PCR試劑盒 | 兔痘病毒PCR檢測(cè)試劑盒 |
?？刹《?/span>RT-PCR試劑盒 | 雙歧桿菌屬通用PCR試劑盒 |
牛分枝桿菌PCR檢測(cè)試劑盒 | 海金沙探針?lè)?/span>PCR鑒定試劑盒 |
牛血吸蟲(chóng)PCR檢測(cè)試劑盒 | PSA 大鼠前列腺特異性抗原ELISA檢測(cè)試劑盒 |
Bcl-2 大鼠B細(xì)胞淋巴瘤因子2ELISA檢測(cè)試劑盒 | 廣州管圓線蟲(chóng)(AC)核suan檢測(cè)試劑盒 |
Bassoon蛋白(BSN)ELISA試劑盒 | 頭孢霉屬通用PCR試劑盒 |
胰島su受體α(INSRA)ELISA試劑盒 | AZT 小鼠氮胸苷ELISA檢測(cè)試劑盒 |
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