樣品 DNA 的制備:
1.用自選方法純化樣品的 DNA,本試劑盒跟市場上大多數(shù)病毒 DNA 提取試劑盒兼 容。。也可以選購本公司的一管式病毒 DNAout 或其升級版柱式病毒 DNAout。 本試劑盒免費贈送 15 次 DNA 病毒裂解液試用裝(一管式病毒 DNAout 的成分)。
稀釋陽性對照(以 10E2-10E7 這 6 個 10 倍稀釋度為例。由于標(biāo)準(zhǔn)品濃度非常高,因此下列稀釋操作一定要在獨立的區(qū)域進(jìn)行,千萬不能污染樣品或本試劑盒的其他成分)。為增加產(chǎn)品穩(wěn)定性和避免擴散傳染性病原,本產(chǎn)品不提供活體樣品做陽性對照,只提供可以直接使用的長為 86bp 的 DNA 片段作為陽性對照。
2.標(biāo)記 6 個離心管,分別為 7,6,5,4,3,2。
3.用帶芯槍頭分別加入 45 μL 模板稀釋液(用帶芯槍頭,下同)。
4.在 7 號管中加入 5 μL 1×10E8 拷貝/μL 的陽性對照,充分震蕩 1 分鐘,得1×10E7 拷貝/μL 的陽性對照。放冰上待用。5.換槍頭,在 6 號管中加入 5 μL 1×10E7 拷貝/μL 的陽性對照(上步稀釋所得),充分震蕩 1 分鐘,得 1×10E6 拷貝/μL 的陽性對照。放冰上待用。
6.換槍頭,在 5 號管中加入 5 μL 1×10E6 拷貝/μL 的陽性對照到 5 號管中,充分震蕩 1 分鐘,得 1×10E5 拷貝/μL 的陽性對照。放冰上待用。
7.換槍頭,在 4 號管中加 5 μL 1×10E5 拷貝/μL 的陽性對照到 4 號管中,得1×10E4 拷貝/μL 的陽性對照。放冰上待用。8.重復(fù)上面的操作直到得到 6 個稀釋度的陽性對照。放冰上待用。
特點:
高特異性:與其他病毒無交叉反應(yīng),無非特異性擴增;
高靈敏度:檢測靈敏度可達(dá)10~100;
操作簡便:該系列所有試劑均采用相同的體系和條件,可同時進(jìn)行多個檢測;
高通量:多種雙重PCR檢測以及三重PCR檢測試劑盒。
產(chǎn)品名稱 | 鯉皰疹病毒通用PCR檢測試劑盒供應(yīng)商 |
英文名稱 | Cyprinid Herpesvirus(CyHV)PCR |
分類 | PCR檢測試劑盒 |
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反應(yīng)五要素:
參加PCR反應(yīng)的物質(zhì)主要有五種即引物、酶、dNTP、模板和Mg2+
引物:引物是PCR特異性反應(yīng)的關(guān)鍵,PCR 產(chǎn)物的特異性取決于引物與模板DNA互補的程度。理論上,只要知道任何一段模板DNA序列, 就能按其設(shè)計互補的寡核苷酸鏈做引物,利用PCR就可將模板DNA在體外大量擴增。設(shè)計引物應(yīng)遵循以下原則:
①引物長度: 15-30bp,常用為20bp左右。
②引物擴增跨度: 以200-500bp為宜,特定條件下可擴增長至10kb的片段。
③引物堿基:G+C含量以40-60%為宜,G+C太少擴增效果不佳,G+C過多易出現(xiàn)非特異條帶。ATGC隨機分布,避免5個以上的嘌呤或嘧啶核苷酸的成串排列。
④避免引物內(nèi)部出現(xiàn)二級結(jié)構(gòu),避免兩條引物間互補,特別是3'端的互補,否則會形成引物二聚體,產(chǎn)生非特異的擴增條帶。
⑤引物3'端的堿基,特別是末及倒數(shù)第二個堿基,應(yīng)嚴(yán)格要求配對,以避免因末端堿基不配對而導(dǎo)致PCR失敗。
⑥引物中有或能加上合適的酶切位點, 被擴增的靶序列有適宜的酶切位點, 這對酶切分析或分子克隆很有好處。
⑦引物的特異性:引物應(yīng)與核酸序列數(shù)據(jù)庫的其它序列無明顯同源性。
引物量:每條引物的濃度0.1~1umol或10~100pmol,以低引物量產(chǎn)生所需要的結(jié)果為好,引物濃度偏高會引起錯配和非特異性擴增,且可增加引物之間形成二聚體的機會。
使用及效果:
PCR反應(yīng)特點
(1) 特異性強
PCR反應(yīng)的特異性決定因素為:
①引物與模板DNA特異正確的結(jié)合;
②堿基配對原則;
③Taq DNA聚合酶合成反應(yīng)的忠實性;
④靶基因的特異性與保守性。
其中引物與模板的正確結(jié)合是關(guān)鍵。引物與模板的結(jié)合及引物鏈的延伸是遵循堿基配對原則的。聚合酶合成反應(yīng)的忠實性及Taq DNA聚合酶耐高溫性,使反應(yīng)中模板與引物的結(jié)合(復(fù)性)可以在較高的溫度下進(jìn)行,結(jié)合的特異性大大增加,被擴增的靶基因片段也就能保持很高的正確度。再通過選擇特異性和保守性高的靶基因區(qū),其特異性程度就更高。
(2) 靈敏度高
PCR產(chǎn)物的生成量是以指數(shù)方式增加的,能將皮克(pg=10-12g)量級的起始待測模板擴增到微克(ug=10-6g)水平。能從100萬個細(xì)胞中檢出一個靶細(xì)胞;在病毒的檢測中,PCR的靈敏度可達(dá)3個RFU(空斑形成單位);在細(xì)菌學(xué)中zui小檢出率為3個細(xì)菌。
(3) 簡便、快速
PCR反應(yīng)用耐高溫的Taq DNA聚合酶,一次性地將反應(yīng)液加好后,即在DNA擴增液和水浴鍋上進(jìn)行變性-退火-延伸反應(yīng),一般在2~4 小時完成擴增反應(yīng)。擴增產(chǎn)物一般用電泳分析,不一定要用同位素,無放射性污染、易推廣。
(4) 對標(biāo)本的純度要求低
不需要分離病毒或細(xì)菌及培養(yǎng)細(xì)胞,DNA 粗制品及總RNA均可作為擴增模板??芍苯佑门R床標(biāo)本如血液、體腔液、洗嗽液、毛發(fā)、細(xì)胞、活PCR技術(shù)概論。
人肌動蛋白束蛋白(FSCN)ELISA試劑盒73-31-4 20mg Melatonine 0.156-10 ng/mL褪素
PNLIP抗體,兔多抗23180-65-6C16H16O5ColuMbianetin acetate≥98%ELISA 二氫歐山芹醋酸酯
人腫瘤壞死因子受體超家族成員9(TNFRSF9)ELISA試劑盒25mg 31.2-2000 pg/mL假馬齒莧皂苷 II BACOPASIDE II(P)
MI培養(yǎng)基5KG 1000mlPEG20000 聚乙二
人二硫化物異構(gòu)酶A4蛋白(PDIA4)ELISA試劑盒100mg 1.56-100 ng/mLDL-α-氨基庚二酸 AMINOPIMELIC ACID, DL-a-(SH)
CIN-1I培養(yǎng)基基礎(chǔ)/耶爾森氏菌選擇性瓊脂/頭孢啶氯苯新生霉素瓊脂/CINAgar96T/48T分離小腸結(jié)腸炎耶爾森氏菌人免疫抑制酸性蛋白(IAP)ELISA試劑盒
ELISAKitforTetrahydrobiopterin10mg 0.78-50 uIU/mL黃芩素-7- BAICALEIN-7-METHYLETHER(RG)
大鼠心肌細(xì)胞,RCM細(xì)胞 20mg HPLC≥98%Wogonoside用于含量測定5 x 10^5 cells/T25培養(yǎng)瓶漢黃芩苷;漢黃芩甙
BMP-2抗體,兔多抗,抗原親和純化5mgELISA 新穿心蓮內(nèi)酯 NEOANDROGRAPHOLIDE(SH)
人線粒體磷酸丙酸羧激酶[GTP](mitochondrialPEPCK-M)ELISA試劑盒5g 0.156-10 ng/mLDL-丙氨酸 ALANINE, DL-(RG)
CD16b/FCGR3B抗體,鼠單抗7432-28-2HPLC≥98%A020520mg/支ELISA 五味子
ELISAKitforHumanCarnitineO-palmitoyltransferase1,liverisoform5mg Dehydrotrametenolic acid 31.2-2000 pg/mL3-氫化去氫松苓酸
大腸桿菌/大腸菌群顯色培養(yǎng)基10G 1000(ML)Indole 吲哚
人富組蛋白(HTN-3)ELISA試劑盒1632110-81-65mg Cimifugin 4'-O-β-D-glucopyranoside 12.5-800 ng/mL升麻素-4'-O-β-D-葡萄糖苷
Half-Fraser培養(yǎng)基顆粒25g 100g 225ml/袋*10葡聚糖凝膠LH-60
ELISAKitforHumanMelanin-concentratinghormonereceptor2100mg 0.156-10 ng/mL4-氨基丁酸 AMINOBUTYRIC ACID, gamma-(GABA)(P)
鯉皰疹病毒通用PCR檢測試劑盒供應(yīng)商Oregon Grape (Mahonia aquifolium) Aerial Parts Extract #6 BXL(REQUEST QUOTE) 1mg 人磷酸二酯酶10A(PDE10A)ELISA試劑盒
大蒜素 ALLICIN [6.2mg/mL](SH) (In Solution) 1mg 人沉默調(diào)節(jié)蛋白7(SIRT7)ELISA試劑盒
澳洲茄胺 C27H43NO2 Solasodine CD177/PRV-1/PRV1抗體,鼠單抗 ≥98%
英國迪康中性清洗液(劑)Decon 90 Decon 90 MRS瓊脂基礎(chǔ)/MRS瓊脂/MRS酸菌瓊脂/MRSA
次烏頭原堿 HPLC≥98% A0643 OX40/CD134抗體,兔多抗,抗原親和純化 20mg/支
2-(芐氧基)乙 2-(Benzyloxy)ethanol >98.0%(GC) 25ML 人組織內(nèi)轉(zhuǎn)化生長因子β結(jié)合蛋白2(LTBP2)ELISA試劑盒
氯化膽固 CHOLESTERYL CHLORIDE(RG) 5g ELISAKitforHumanNKG2Dligand2
硫酸長春堿 HPLC≥98% A0669 CD208/LAMP3/DC-LAMP抗體,鼠單抗 20mg/支