雪腐鐮刀菌PCR檢測試劑盒說明書

特點：
高特異性：與其他病毒無交叉反應(yīng)，無非特異性擴(kuò)增；
高靈敏度：檢測靈敏度可達(dá)10~100；
操作簡便：該系列所有試劑均采用相同的體系和條件，可同時進(jìn)行多個檢測；
高通量：多種雙重PCR檢測以及三重PCR檢測試劑盒。

樣品 DNA 的制備：
1.用自選方法純化樣品的 DNA，本試劑盒跟市場上大多數(shù)病毒 DNA 提取試劑盒兼 容。。也可以選購本公司的一管式病毒 DNAout 或其升級版柱式病毒 DNAout。 本試劑盒免費(fèi)贈送 15 次 DNA 病毒裂解液試用裝（一管式病毒 DNAout 的成分）。
稀釋陽性對照（以 10E2-10E7 這 6 個 10 倍稀釋度為例。由于標(biāo)準(zhǔn)品濃度非常高，因此下列稀釋操作一定要在獨(dú)立的區(qū)域進(jìn)行，千萬不能污染樣品或本試劑盒的其他成分）。為增加產(chǎn)品穩(wěn)定性和避免擴(kuò)散傳染性病原，本產(chǎn)品不提供活體樣品做陽性對照，只提供可以直接使用的長為 86bp 的 DNA 片段作為陽性對照。
2.標(biāo)記 6 個離心管，分別為 7，6，5，4，3，2。
3.用帶芯槍頭分別加入 45 μL 模板稀釋液（用帶芯槍頭，下同）。
4.在 7 號管中加入 5 μL 1×10E8 拷貝/μL 的陽性對照，充分震蕩 1 分鐘，得1×10E7 拷貝/μL 的陽性對照。放冰上待用。5.換槍頭，在 6 號管中加入 5 μL 1×10E7 拷貝/μL 的陽性對照(上步稀釋所得)，充分震蕩 1 分鐘，得 1×10E6 拷貝/μL 的陽性對照。放冰上待用。
6.換槍頭，在 5 號管中加入 5 μL 1×10E6 拷貝/μL 的陽性對照到 5 號管中，充分震蕩 1 分鐘，得 1×10E5 拷貝/μL 的陽性對照。放冰上待用。
7.換槍頭，在 4 號管中加 5 μL 1×10E5 拷貝/μL 的陽性對照到 4 號管中，得1×10E4 拷貝/μL 的陽性對照。放冰上待用。8.重復(fù)上面的操作直到得到 6 個稀釋度的陽性對照。放冰上待用。
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使用及效果：
PCR反應(yīng)特點
(1) 特異性強(qiáng)
PCR反應(yīng)的特異性決定因素為：
①引物與模板DNA特異正確的結(jié)合；
②堿基配對原則；
③Taq DNA聚合酶合成反應(yīng)的忠實性；
④靶基因的特異性與保守性。
其中引物與模板的正確結(jié)合是關(guān)鍵。引物與模板的結(jié)合及引物鏈的延伸是遵循堿基配對原則的。聚合酶合成反應(yīng)的忠實性及Taq DNA聚合酶耐高溫性，使反應(yīng)中模板與引物的結(jié)合(復(fù)性)可以在較高的溫度下進(jìn)行，結(jié)合的特異性大大增加，被擴(kuò)增的靶基因片段也就能保持很高的正確度。再通過選擇特異性和保守性高的靶基因區(qū)，其特異性程度就更高。
(2) 靈敏度高
PCR產(chǎn)物的生成量是以指數(shù)方式增加的，能將皮克(pg=10-12g)量級的起始待測模板擴(kuò)增到微克(ug=10-6g)水平。能從100萬個細(xì)胞中檢出一個靶細(xì)胞；在病毒的檢測中，PCR的靈敏度可達(dá)3個RFU(空斑形成單位)；在細(xì)菌學(xué)中zui小檢出率為3個細(xì)菌。
(3) 簡便、快速
PCR反應(yīng)用耐高溫的Taq DNA聚合酶，一次性地將反應(yīng)液加好后，即在DNA擴(kuò)增液和水浴鍋上進(jìn)行變性-退火-延伸反應(yīng)，一般在2～4 小時完成擴(kuò)增反應(yīng)。擴(kuò)增產(chǎn)物一般用電泳分析，不一定要用同位素，無放射性污染、易推廣。
(4) 對標(biāo)本的純度要求低
不需要分離病毒或細(xì)菌及培養(yǎng)細(xì)胞，DNA 粗制品及總RNA均可作為擴(kuò)增模板?？芍苯佑门R床標(biāo)本如血液、體腔液、洗嗽液、毛發(fā)、細(xì)胞、活PCR技術(shù)概論。

反應(yīng)五要素：
參加PCR反應(yīng)的物質(zhì)主要有五種即引物、酶、dNTP、模板和Mg2+
引物：引物是PCR特異性反應(yīng)的關(guān)鍵，PCR 產(chǎn)物的特異性取決于引物與模板DNA互補(bǔ)的程度。理論上，只要知道任何一段模板DNA序列， 就能按其設(shè)計互補(bǔ)的寡核苷酸鏈做引物，利用PCR就可將模板DNA在體外大量擴(kuò)增。設(shè)計引物應(yīng)遵循以下原則：
①引物長度： 15-30bp，常用為20bp左右。
②引物擴(kuò)增跨度： 以200-500bp為宜，特定條件下可擴(kuò)增長至10kb的片段。
③引物堿基：G+C含量以40-60%為宜，G+C太少擴(kuò)增效果不佳，G+C過多易出現(xiàn)非特異條帶。ATGC隨機(jī)分布，避免5個以上的嘌呤或嘧啶核苷酸的成串排列。
④避免引物內(nèi)部出現(xiàn)二級結(jié)構(gòu)，避免兩條引物間互補(bǔ)，特別是3'端的互補(bǔ)，否則會形成引物二聚體，產(chǎn)生非特異的擴(kuò)增條帶。
⑤引物3'端的堿基，特別是末及倒數(shù)第二個堿基，應(yīng)嚴(yán)格要求配對，以避免因末端堿基不配對而導(dǎo)致PCR失敗。
⑥引物中有或能加上合適的酶切位點， 被擴(kuò)增的靶序列有適宜的酶切位點， 這對酶切分析或分子克隆很有好處。
⑦引物的特異性：引物應(yīng)與核酸序列數(shù)據(jù)庫的其它序列無明顯同源性。
引物量：每條引物的濃度0.1～1umol或10～100pmol，以低引物量產(chǎn)生所需要的結(jié)果為好，引物濃度偏高會引起錯配和非特異性擴(kuò)增，且可增加引物之間形成二聚體的機(jī)會。

FABP2/I-FABP抗體,兔多抗,抗原親和純化5mgELISA   西紅花苷 CROCIN(AS)

人卷曲螺旋域包含蛋白82(Coiled-coildomain-containingprotein82)ELISA試劑盒526-07-8 20mgSesamolin HPLC≥98 31.2-2000 pg/mL芝麻林素

Angiotensinogen/SerpinA8/AGT抗體,鼠單抗38647-10-8HPLC≥98%A010520mg/支FCM   IF   ICC/IF  雷公藤乙素

ELISAKitforHumanComplementC328957-04-2 20mg Oridonin 3.12-200 U/L冬凌草素

CXADR抗體,兔單抗C21H20O10Aloe-emodin-3-CH2-O-β-D-glucopyranoside HPLC≥98%ELISA   蘆薈大黃素-3羥基-O-葡萄糖苷

人白細(xì)胞抗原B27(HLA-B27)ELISA試劑盒53931-25-210mg  Hederagenin 28-O-β-D-glucopyranosyl ester 0.312-20 ng/mL常春藤皂苷元-28-O-β-D-葡萄糖酯苷

革蘭氏染色液20mg 5ml*8核黃素腺嘌呤二核苷酸二鈉 FAD

ELISAKitforHumanGhrelinO-acyltransferase100mg 0.312-20 ng/mL3,4-二羥基苯乙酸 DIHYDROXYPHENYLACETIC ACID, 3,4-(RG)

小鼠胰胰島細(xì)胞 20mg HPLC≥95%Agrimol B用于鑒別5 x 10^5 cells/T25培養(yǎng)瓶仙鶴草B

人磷脂酶D2(PLD2)ELISA試劑盒25mg 0.78-50 ng/mL阿嗎靈 AJMALINE(P)

ER培養(yǎng)基（含維生素）/ErikssonMediumwithvitaminsASBC3017BR5-氨基熒光素

ELISAKitforHumanE3ubiquitin-proteinligaseUBR42 x 5mg 0.625-40 ng/mL馬兜鈴酸標(biāo)準(zhǔn)品試劑盒 ARISTOLOCHIC ACID STANDARDS KIT(P)

小鼠頸動脈平滑肌細(xì)胞 20mg HPLC≥98%Cyanidin-3-O-glucoside chloride用于含量測定5 x 10^5 cells/T25培養(yǎng)瓶矢車菊素-3-O-葡萄糖苷；花青素

TrkC/NTRK3抗體,兔單抗20mg/支HPLC≥98%10309-37-2ELISA   補(bǔ)骨脂

人BH3結(jié)構(gòu)域凋亡誘導(dǎo)蛋白(Bid)ELISA試劑盒5088-75-5 20mgNeoliquiritin HPLC≥98% 0.156-10 ng/mL新甘草苷

EB增菌肉湯培養(yǎng)基基礎(chǔ)/EB增菌液/EBEnrichmentBrothMediumASBC2001單核細(xì)胞增生李氏特菌增菌2'-脫氧鳥苷

雪腐鐮刀菌PCR檢測試劑盒說明書土槿皮丙酸  A0720 Tie1抗體(PE),鼠單抗

Giemsa stain 姬姆色素染料  1g M17瓊脂

黃芪皂苷Ⅲ；黃芪皂甙Ⅲ  HPLC≥98% Astragaloside III 人關(guān)節(jié)炎滑膜成纖維細(xì)胞 用于含量測定

氯化纈草素 20mg valechlorine ELISAKitforHumanAcrosin HPLC≥98%

DODECA-2(E),4(E)-DIENOIC ACID ETHYL ESTER(SG)  5mg ELISAKitforHumanSerumparaoxonase/arylesterase2

隱綠原酸（4-咖?？鼘幩幔?HPLC≥99% A0024 CTLA-4/CD152抗體,鼠單抗 20mg/支

1-丁 1-Butanol >99.0%(GC)  25ML 人LIM同源框轉(zhuǎn)錄因子1-betaELISA試劑盒

小白菊內(nèi)酯 HPLC≥98% A0385 CD200R1抗體,鼠單抗 20mg/支