【適用范圍】
T7 RNA聚合酶（T7 RNA Polymerase）是一種是一種來(lái)源于T7噬箇體的RNA聚合酶，分子量約99kDa。專門催化5'→3'方向的RNA形成過(guò)程，對(duì)T7噬箇體啟動(dòng)子具有高特異性。T7 RNA聚合酶是一種DNA 依賴性的RNA 聚合酶,能夠在體外以單鏈或雙鏈DNA為模板，從啟動(dòng)子開(kāi)始催化模板DNA下游5'→3' RNA 合成，具有高的轉(zhuǎn)錄效率。
【產(chǎn)品組分】
組分 | 體積 |
T7 RNA聚合酶（1mg/mL） | 20 μL |
5×Transcription Buffer | 50 μL |
1×Transcription Buffer: 40 mM Tris-HCl, pH 7.8, 20 mM NaCl2, 6 mM MgCl2, 2 mM spermidine-HCl, 10 mM DTT
【儲(chǔ)存條件及效期】
T7 RNA聚合酶 于-20 ℃保存，有效期為24 個(gè)月。
【熱失活】
70℃，10min
【反應(yīng)體系及條件】
組分 | 體積 |
5×Transcription Buffer | 10μL |
ATP/GTP/CTP/UTP(25 mM each) | 4μL |
T7 RNA Polymerase（1 mg/ mL） | 5μL |
RNase Inhibitor（40 U/μl） | 1μL |
DNA 模板 | 1μg |
DEPC-treated Water | Up to 50 μL |
a. 37度孵育2小時(shí)
b. 如需去除DNA模板，加入2μL DNase I（1U/μl）終止反應(yīng)
c. 終止反應(yīng)：加入2 μL 0.2 M EDTA(pH8.0)或者 70°C反應(yīng)10 min。
【注意事項(xiàng)】
1. 轉(zhuǎn)錄反應(yīng)體系的配制應(yīng)在無(wú) RNase 污染的環(huán)境中完成，操作過(guò)程建議佩戴手套以及口罩，使用高壓滅菌的水及槍頭。
2. 該酶活性強(qiáng)，對(duì)模板DNA純度要求不高，PCR產(chǎn)物經(jīng)乙醇沉淀后可直接用于轉(zhuǎn)錄。
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