| 一、細(xì)胞基本屬性 | |
| 細(xì)胞名稱 | 人胃癌細(xì)胞 |
| 細(xì)胞別稱 | KATO III; Kato Ill; Kato-ll; KATO-II; KATOIl; Katolll; KATO 3; JTC-28; Japanese Tissue Culture-28 |
| 細(xì)胞貨號(hào) | SNL-105 |
| 細(xì)胞種屬 | 人 |
| 生長(zhǎng)情況 | 半貼壁 |
| 培養(yǎng)條件 | 1640+10%FBS+1%雙抗 |
| 培養(yǎng)環(huán)境 | air, 95%; carbon dioxide (CO2), 5% |
| 二、細(xì)胞培養(yǎng)操作 | |
| 換液周期 | 2-3天 |
| 培養(yǎng)基體積 | T25瓶10-12ml；10cm皿12-15ml |
| 傳代比例 | 1:2-1:4（具體情況視細(xì)胞生長(zhǎng)速度及密度決定） |
| 傳代方法 | 1.輕輕吸走培養(yǎng)上清，留2-3ml培養(yǎng)基輕輕吹打細(xì)胞面吹下細(xì)胞； 2.混勻細(xì)胞，收集細(xì)胞培養(yǎng)基，900rpm離心3-5min，棄上清； 3.加新的*培養(yǎng)基輕輕重懸細(xì)胞，均勻分到新的培養(yǎng)瓶里； 4.補(bǔ)足*培養(yǎng)基，將培養(yǎng)瓶放回培養(yǎng)箱靜置培養(yǎng)； |
| 注意事項(xiàng) | 半貼壁細(xì)胞會(huì)附著瓶底，但貼壁不緊，輕輕吸取培養(yǎng)基輕輕吹打細(xì)胞面就會(huì)脫落，不需要胰酶消化。建議使用培養(yǎng)皿培養(yǎng)，更適合吹打細(xì)胞操作，吹打細(xì)胞注意盡量輕柔，不要產(chǎn)生過(guò)多氣泡以免影響細(xì)胞狀態(tài)。 |
| 三、細(xì)胞凍存操作 | |
| 凍存液配方 | 92%FBS+8%DMSO(新手tui薦)或92%*培養(yǎng)基+8%DMSO(高手tui薦); |
| 凍存規(guī)格 | 200-300萬(wàn)/ml，1ml每管 |
| 凍存方法 | 1.消化并離心獲得細(xì)胞沉淀后，加配置好的凍存液輕輕重懸細(xì)胞； 2.將細(xì)胞懸液盡快移入已經(jīng)做好標(biāo)記的凍存管； 3.將凍存管轉(zhuǎn)入程序凍存盒，放入-80度冰箱過(guò)夜，第二天轉(zhuǎn)入液氮保存；沒(méi)有程序凍存盒的實(shí)驗(yàn)室，加入細(xì)胞后可以將凍存管放在泡沫盒中4度靜置5-10min，再-20度靜置2h后轉(zhuǎn)入-80度過(guò)夜，第二天轉(zhuǎn)入液氮保存 |
| 注意事項(xiàng) | 凍存細(xì)胞轉(zhuǎn)入液氮后及時(shí)復(fù)蘇一管檢查細(xì)胞凍存活性，若有異常，及時(shí)調(diào)整實(shí)驗(yàn)方案 |
Tips：
1.細(xì)胞半貼壁圓形生長(zhǎng)，大量懸浮圓形，傳代時(shí)均可收集培養(yǎng)，換液時(shí)將懸浮細(xì)胞離心收集后重新接回原瓶；
2.傳代有部分細(xì)胞碎片可以換液后用PBS潤(rùn)洗細(xì)胞清除，使用的PBS需要恢復(fù)到室溫，加入時(shí)不要沖到細(xì)胞面，潤(rùn)洗盡量輕柔；
3.該細(xì)胞生長(zhǎng)極慢，比較容易死亡，不建議沒(méi)有相關(guān)細(xì)胞操作經(jīng)驗(yàn)的客戶單獨(dú)培養(yǎng)該細(xì)胞；
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