制藥網(wǎng)
詳細(xì)介紹
PikoOrange蛋白定量試劑盒
產(chǎn)品名稱 | 貨號(hào) | 規(guī)格 | 保存 | 價(jià)格(元) |
PikoOrange 蛋白定量試劑盒 | D1101L1128 | 100 assays | 室溫 | 180 |
產(chǎn)品描述
PikoOrange Protein Quantitation Kit是一個(gè)高度敏感的基于熒光技術(shù)定量純化蛋白質(zhì)的試劑盒，其檢測(cè)蛋白濃度范圍為0.1-15 ug/ml。比起傳統(tǒng)定量方法如BCA、Bradford或Lowry蛋白定量分析，PikoOrange蛋白定量試劑盒敏感性更佳，此外，與NanoOrange蛋白質(zhì)定量測(cè)定技術(shù)相比具有更加優(yōu)秀的線性和重現(xiàn)性。可顯示不同蛋白質(zhì)之間的zui小變異性，且熒光信號(hào)穩(wěn)定長(zhǎng)達(dá)16小時(shí)；其受測(cè)樣本不論為純化蛋白或抗體皆適用。 需特別注意的是，PikoOrange對(duì)鹽類、緩沖液、去垢劑或是其他化學(xué)物質(zhì)都有不同程度的耐受性（表2）。 | 圖1：PikoOrange比NanoOrange有更好的線性和重現(xiàn)性 |
產(chǎn)品組分
組分 | D1201L2222 | D1201L2221 |
A: PikoOrange buffer, 10X (contains 2mM sodium azide) | 2.5 mL | 25mL |
B: PikoOrange dye, 500X in DMSO | 50 uL | 0.5 mL |
C: Bovine serum albumin (BSA) standard, 2mg/mL (contains 2 mM sodium azide) | 40 uL | 0.4 mL |
技術(shù)參數(shù)
Ex/Em 480/598 nm （結(jié)合BSA）。
運(yùn)輸和保存方法
室溫保存，不要冷藏PikoOrange緩沖液。PikoOrange Dye需避光保存，產(chǎn)品可穩(wěn)定保存至少12個(gè)月。如果緩沖液出現(xiàn)沉淀，可加熱到37℃并漩渦溶解。如果長(zhǎng)時(shí)間不用，組分C應(yīng)避光保存在4℃。
使用方法
1、準(zhǔn)備1x PikoOrange緩沖液: 1:10 稀釋10x緩沖液在dH2O。例如，添加1 mL10x 緩沖液至9 mL dH2O. 1 x PikoOrange緩沖液可以儲(chǔ)存在室溫下。
2、使用前準(zhǔn)備PikoOrange工作液：將500xPikoOrange染料按1:500用1x PikoOrange緩沖液稀釋。例如，添加10 uL 500xPikoOrange染料值5 mL 1x PikoOrange緩沖液。
注意：您將需要大約3 mL工作液制作標(biāo)準(zhǔn)曲線（見表1)以及每孔檢測(cè)樣品250 ul工作液。
3、準(zhǔn)備未知樣本：10 uL 樣本添加 250 uLPikoOrange工作液。
注意：您可能需要稀釋未知樣本的得到不同濃度的樣本。樣品稀釋可能會(huì)減少干擾物質(zhì)的影響。
4、準(zhǔn)備一個(gè)蛋白質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)曲線所需的BSA濃度，如表1所示。
5、樣本和標(biāo)準(zhǔn)蛋白加熱至90- 95℃ 10分鐘，此過程需避光操作。
6、取出樣本室溫避光放置20分鐘冷卻。短時(shí)間離心以收集全部樣本。
7、每個(gè)標(biāo)準(zhǔn)樣品或未知樣品取200 uL轉(zhuǎn)移到96孔酶標(biāo)板，熒光酶標(biāo)儀讀數(shù)。激發(fā)/發(fā)射波長(zhǎng)為480/598 nm。
注意：另外，樣品可以被轉(zhuǎn)移到熒光試管使用熒光儀測(cè)量。如果需要超過200 uL體積測(cè)量，等比例放大配置方案。
表1：準(zhǔn)備BSA樣品制作標(biāo)準(zhǔn)曲線
| BAS體積 | 工作液體積 | BSA 終濃度（ug/mL） |
A | 7.5 uL BSA std (2mg/mL) | 1 mL | 15 |
B | 333 uL solution A | 167 uL | 10 |
C | 250 uL solution B | 250 uL | 5 |
D | 250 uL solution C | 250 uL | 2.5 |
E | 200 uL solution D | 300 uL | 1 |
F | 250 uL solution E | 250 uL | 0.5 |
G | 250 uL solution F | 250 uL | 0.25 |
H | 100 uL solution G | 150 uL | 0.1 |
I | 0 mL | 250 uL | 0 |
表2：PikoOrange對(duì)不同化學(xué)物質(zhì)的耐受性
化合物 | zui高承受濃度 |
SDS | 0.01% |
Triton X-100 | Below 0.001% |
Tween 20 | Below 0.001% |
CHAPS | Below 0.001% |
Sodium deoxycholate (DOC) | Below 0.001% |
Urea | 10 mM |
DTT | 100 mM |
beta-ME | 0.1% |
Ammonium sulfate | 1 mM |
Sodium azide | 2 mM |
Imidazole | 50 mM |
DNA | 10ug/mL |
EDTA | 1mM |
Sucrose | 10 mM (0.34%) |
Glycerol | 1% |
PBS | 0.02X |
NaCl | 1 mM |
CaCl2 | 0.01 mM |
MgCl2 | 0.2 mM
|
制藥網(wǎng)