鯉皰疹病型PCR檢測試劑盒 返回列表頁

反應(yīng)五要素：
參加PCR反應(yīng)的物質(zhì)主要有五種即引物、酶、dNTP、模板和Mg2+
引物：引物是PCR特異性反應(yīng)的關(guān)鍵，PCR 產(chǎn)物的特異性取決于引物與模板DNA互補(bǔ)的程度。理論上，只要知道任何一段模板DNA序列， 就能按其設(shè)計(jì)互補(bǔ)的寡核苷酸鏈做引物，利用PCR就可將模板DNA在體外大量擴(kuò)增。設(shè)計(jì)引物應(yīng)遵循以下原則：
①引物長度： 15-30bp，常用為20bp左右。
②引物擴(kuò)增跨度： 以200-500bp為宜，特定條件下可擴(kuò)增長至10kb的片段。
③引物堿基：G+C含量以40-60%為宜，G+C太少擴(kuò)增效果不佳，G+C過多易出現(xiàn)非特異條帶。ATGC隨機(jī)分布，避免5個(gè)以上的嘌呤或嘧啶核苷酸的成串排列。
④避免引物內(nèi)部出現(xiàn)二級結(jié)構(gòu)，避免兩條引物間互補(bǔ)，特別是3'端的互補(bǔ)，否則會形成引物二聚體，產(chǎn)生非特異的擴(kuò)增條帶。
⑤引物3'端的堿基，特別是末及倒數(shù)第二個(gè)堿基，應(yīng)嚴(yán)格要求配對，以避免因末端堿基不配對而導(dǎo)致PCR失敗。
⑥引物中有或能加上合適的酶切位點(diǎn)， 被擴(kuò)增的靶序列有適宜的酶切位點(diǎn)， 這對酶切分析或分子克隆很有好處。
⑦引物的特異性：引物應(yīng)與核酸序列數(shù)據(jù)庫的其它序列無明顯同源性。
引物量：每條引物的濃度0.1～1umol或10～100pmol，以低引物量產(chǎn)生所需要的結(jié)果為好，引物濃度偏高會引起錯(cuò)配和非特異性擴(kuò)增，且可增加引物之間形成二聚體的機(jī)會。

特點(diǎn)：
高特異性：與其他病毒無交叉反應(yīng)，無非特異性擴(kuò)增；
高靈敏度：檢測靈敏度可達(dá)10~100；
操作簡便：該系列所有試劑均采用相同的體系和條件，可同時(shí)進(jìn)行多個(gè)檢測；
高通量：多種雙重PCR檢測以及三重PCR檢測試劑盒。

樣品 DNA 的制備：
1.用自選方法純化樣品的 DNA，本試劑盒跟市場上大多數(shù)病毒 DNA 提取試劑盒兼 容。。也可以選購本公司的一管式病毒 DNAout 或其升級版柱式病毒 DNAout。 本試劑盒免費(fèi)贈送 15 次 DNA 病毒裂解液試用裝（一管式病毒 DNAout 的成分）。
稀釋陽性對照（以 10E2-10E7 這 6 個(gè) 10 倍稀釋度為例。由于標(biāo)準(zhǔn)品濃度非常高，因此下列稀釋操作一定要在獨(dú)立的區(qū)域進(jìn)行，千萬不能污染樣品或本試劑盒的其他成分）。為增加產(chǎn)品穩(wěn)定性和避免擴(kuò)散傳染性病原，本產(chǎn)品不提供活體樣品做陽性對照，只提供可以直接使用的長為 86bp 的 DNA 片段作為陽性對照。
2.標(biāo)記 6 個(gè)離心管，分別為 7，6，5，4，3，2。
3.用帶芯槍頭分別加入 45 μL 模板稀釋液（用帶芯槍頭，下同）。
4.在 7 號管中加入 5 μL 1×10E8 拷貝/μL 的陽性對照，充分震蕩 1 分鐘，得1×10E7 拷貝/μL 的陽性對照。放冰上待用。5.換槍頭，在 6 號管中加入 5 μL 1×10E7 拷貝/μL 的陽性對照(上步稀釋所得)，充分震蕩 1 分鐘，得 1×10E6 拷貝/μL 的陽性對照。放冰上待用。
6.換槍頭，在 5 號管中加入 5 μL 1×10E6 拷貝/μL 的陽性對照到 5 號管中，充分震蕩 1 分鐘，得 1×10E5 拷貝/μL 的陽性對照。放冰上待用。
7.換槍頭，在 4 號管中加 5 μL 1×10E5 拷貝/μL 的陽性對照到 4 號管中，得1×10E4 拷貝/μL 的陽性對照。放冰上待用。8.重復(fù)上面的操作直到得到 6 個(gè)稀釋度的陽性對照。放冰上待用。
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使用及效果：
PCR反應(yīng)特點(diǎn)
(1) 特異性強(qiáng)
PCR反應(yīng)的特異性決定因素為：
①引物與模板DNA特異正確的結(jié)合；
②堿基配對原則；
③Taq DNA聚合酶合成反應(yīng)的忠實(shí)性；
④靶基因的特異性與保守性。
其中引物與模板的正確結(jié)合是關(guān)鍵。引物與模板的結(jié)合及引物鏈的延伸是遵循堿基配對原則的。聚合酶合成反應(yīng)的忠實(shí)性及Taq DNA聚合酶耐高溫性，使反應(yīng)中模板與引物的結(jié)合(復(fù)性)可以在較高的溫度下進(jìn)行，結(jié)合的特異性大大增加，被擴(kuò)增的靶基因片段也就能保持很高的正確度。再通過選擇特異性和保守性高的靶基因區(qū)，其特異性程度就更高。
(2) 靈敏度高
PCR產(chǎn)物的生成量是以指數(shù)方式增加的，能將皮克(pg=10-12g)量級的起始待測模板擴(kuò)增到微克(ug=10-6g)水平。能從100萬個(gè)細(xì)胞中檢出一個(gè)靶細(xì)胞；在病毒的檢測中，PCR的靈敏度可達(dá)3個(gè)RFU(空斑形成單位)；在細(xì)菌學(xué)中zui小檢出率為3個(gè)細(xì)菌。
(3) 簡便、快速
PCR反應(yīng)用耐高溫的Taq DNA聚合酶，一次性地將反應(yīng)液加好后，即在DNA擴(kuò)增液和水浴鍋上進(jìn)行變性-退火-延伸反應(yīng)，一般在2～4 小時(shí)完成擴(kuò)增反應(yīng)。擴(kuò)增產(chǎn)物一般用電泳分析，不一定要用同位素，無放射性污染、易推廣。
(4) 對標(biāo)本的純度要求低
不需要分離病毒或細(xì)菌及培養(yǎng)細(xì)胞，DNA 粗制品及總RNA均可作為擴(kuò)增模板。可直接用臨床標(biāo)本如血液、體腔液、洗嗽液、毛發(fā)、細(xì)胞、活PCR技術(shù)概論。

ELISAKitforHumanE3ubiquitin-proteinligaseTRIM221kg 0.312-20 ng/mL咖酸 CAFFEIC ACID(RG)

人基轉(zhuǎn)移酶1A1(ST1A1)ELISA試劑盒2 x 10mg 0.156-10 ng/mL刺五加苷標(biāo)準(zhǔn)品試劑盒# 1 ELEUTHEROSIDE STANDARDS KIT #1(P)

人骨髓漿細(xì)胞瘤株，AMO-1細(xì)胞 20mg HPLC≥98%Demethyleneberberine去亞基小檗堿 25459-91-01 x 10^6 cells/T25培養(yǎng)瓶去亞基小檗堿

CD155/PVR/NECL5抗體,兔多抗5 UnitsELISA   WB   軟骨素AC裂解酶 CHONDROITINASE AC II(Prepared in Buffer Solution)(RG)(PLEASE CALL)

腦膜炎瑟菌通用型(NM-U)核酸檢測試劑盒(PCR-熒光探針法)989-51-5 20mgEpigallocatechin gallate；EGCG HPLC≥98% 78-5000 pg/mL表沒食子兒茶素沒食子酸酯

CD146/MCAM抗體,鼠單抗 79-81-2 100mg 0.96ELISA   維生素A棕櫚酸酯

人半胱氨酸雙加氧酶I(CDOI)ELISA試劑盒4429-63-4 20mg Tabersonine 0.312-20 nmol/mL水甘草堿

CarboxypeptidaseB1/CPB1抗體,鼠單抗158732-55-9A0724ELISA   七葉皂苷C

ELISAKitforHumanForkheadboxproteinO1480-41-1 20mg Naringenin 15.6-1000 pg/mL柚皮素

RRM2B/P53R2抗體,鼠單抗96574-01-5C26H22O10Salvianolic acid A≥98%ELISA   WB   丹酸A

諾沃克病毒(NV)核酸檢測試劑盒(PCR-熒光探針法)67920-52-9 20mgSodium Danshensu HPLC≥98% 15.6-1000 pg/mL丹參素鈉

菌種芽孢培養(yǎng)基1g 250g(4000萬IU/克)維生素D3

ELISAKitforHumanProteinkinaseCgammatype1mg 0.156-10 ng/mLForskohlii (Plectranthus barbatus) Root Extract #4 BXL(REQUEST QUOTE)

假單胞F瓊脂/PseudomonasAgarF143390-89-0銅綠（綠膿）假單胞菌色素生成試驗(yàn)143390-89-0 Kresoxim-methyl Standard

人轉(zhuǎn)膠蛋白2(TAGLN2)ELISA試劑盒 0.78-50 ng/mL基補(bǔ)骨脂黃 A BAVACHININ A(P)(PLEASE CALL)

人狀腺上皮細(xì)胞 20mg HPLC≥98%Baicalin用于含量測定5 x 10^5 cells/T25培養(yǎng)瓶黃芩苷；黃芩甙

鯉皰疹病型PCR檢測試劑盒馬兜鈴酸標(biāo)準(zhǔn)品試劑盒 ARISTOLOCHIC ACID STANDARDS KIT(P)  2 x 5mg ELISAKitforHumanE3ubiquitin-proteinligaseUBR4

磷酸丙酸單環(huán)己銨鹽/PEP  0.5g/1g 沙氏葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基顆粒

選擇性強(qiáng)的MEK1抑制劑 PD184352  165-26761 脫羧酶對照試驗(yàn)培養(yǎng)基/DecarboxylaseControlMedium

烏藥內(nèi)酯  HPLC≥98% Linderane 小鼠胃成纖維細(xì)胞 用于含量測定

wako 607-91-0 Myristicin 肉豆蔻  607-91-0 酪蛋白胨/酪胨/胰酪胨/胰酪蛋白胨/Casitone

Plantain (Plantago major) Leaves Extract #1 BXL(REQUEST QUOTE)  1mg ELISAKitforHumanPeroxiredoxin-2

異蓮花掌苷 C23H26O11 Isolindleyin G-CSFR/CD114/CSF3R抗體,鼠單抗 ≥98%

澳洲茄堿；α-澳洲茄堿,茄解堿 20mg Solasonine 豬鏈球菌Ⅱ型(SS-Ⅱ)核酸檢測試劑盒 HPLC≥98%