雞傳染性支氣管炎抗體檢測(cè)試劑盒使用說(shuō)明書(shū)
產(chǎn)品咨詢：
【用途】
用來(lái)檢測(cè)雞血清中的禽傳染性支氣管炎病毒（IBV）抗體
【試驗(yàn)原理】
臨床上，傳染性支氣管炎是一種急性、高度傳染的病毒性疾病，任何日齡的雞都可以感染。IBV的潛伏期為24-72小時(shí)。疾病侵害雞的呼吸系統(tǒng)和泌尿系統(tǒng)。青年雞表現(xiàn)為急性呼吸道癥狀及氣管損傷。死亡率可高達(dá)100%。血清中的病毒抗體可通過(guò)酶聯(lián)免疫的方法檢測(cè)。血清中的IBV抗體水平及整個(gè)雞群的免疫狀況可用ELISA方法進(jìn)行監(jiān)測(cè)。
將滅活的抗原包被在微孔板上，加入稀釋后的血清并孵育，血清中的抗IBV抗體將與包被在微孔板上的IBV結(jié)合，形成IBV抗原-抗體復(fù)合物。然后洗掉未結(jié)合的物質(zhì)，加堿性磷酸酶標(biāo)記的抗雞IgG的酶標(biāo)結(jié)合物至微孔板中，酶標(biāo)物將與IBV抗原-抗體復(fù)合物結(jié)合。孵育后洗掉未結(jié)合的結(jié)合物，然后加入底物溶液。底物與堿性磷酸酶反應(yīng)并生成一種黃色的產(chǎn)物，zui后終止反應(yīng)，將顏色固定。顏色的深淺可用酶標(biāo)儀（405-410nm）測(cè)定。
【一個(gè)微孔板所需的試劑的量】
樣品平均吸光度值 － 陰性對(duì)照吸平均吸光度值 | ＝樣品與陽(yáng)性對(duì)照比值（Sp） |
陽(yáng)性對(duì)照平均吸光度值 － 陰性對(duì)照平均吸光度值 |
Sp ×（100）＝ ELISA Unit （EU） 陽(yáng)性對(duì)照值設(shè)為100 EU
【結(jié)果判定及EU單位說(shuō)明】
IBV ELISA 值 說(shuō)明
小于10EUs IBV抗體為陰性
10-15 EUs IBV抗體為弱陽(yáng)性，應(yīng)被認(rèn)為經(jīng)過(guò)免疫或暴露于IBV，油乳狀疫苗也可能引起非特異性低水平抗體。
15-75 EUs IBV抗體適度陽(yáng)性
＞75 EUs IBV抗體強(qiáng)陽(yáng)性
【操作步驟】
1. 將試劑回溫至室溫，通過(guò)顛倒和渦旋將試劑混勻。
2. 將1份4×樣品稀釋液加入到含3份去離子水的容器中，充分混勻，例如，30ml 4×樣品稀釋液加入到90ml去離子水中。
3. 將1份20×洗滌液加入到含19份去離子水的容器中，充分混勻，例如，25ml 20×洗滌液加入到475ml去離子水中。
4. 稀釋前將陽(yáng)性對(duì)照、陰性對(duì)照和樣品震蕩均勻。
5. 陽(yáng)性對(duì)照、陰性對(duì)照和樣品均需要用樣品稀釋液稀釋后使用。稀釋比例為2μl ：800μl。將移液器調(diào)到100μl，反復(fù)吹打4次使之充分混勻。
6. 將稀釋后的陰性對(duì)照、陽(yáng)性對(duì)照分別加入微孔中，每種做兩個(gè)平行，每孔100μl；將稀釋后的樣品100μl分別加入孔中，室溫下靜置30分鐘。
7. 棄去微孔板中溶液，每孔加入300μl洗滌液洗滌，重復(fù)洗滌2次，在洗滌過(guò)程中防止酶標(biāo)板變干。
8. 每孔立即加入100μl結(jié)合物，室溫靜置30分鐘。
9. 重復(fù)步驟7進(jìn)行洗板。
10. 每孔立即加入100μl底物，室溫靜置30分鐘。
11. 不要倒掉板內(nèi)液體，每孔立即加入100μl終止液。
12. 用酶標(biāo)儀雙波讀數(shù)（405nm或410nm作為主要波長(zhǎng)，630nm或650nm為參考波長(zhǎng)），計(jì)算結(jié)果。
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什么是雞傳染性支氣管炎？
雞傳染性支氣管炎是由傳染性支氣管炎病毒引起的雞的一種急性高度接觸性呼吸道傳染病。其臨診特征是呼吸困難、發(fā)出羅音、咳嗽、張口呼吸、打噴嚏。如果病原不是腎病變型毒株或不發(fā)生并發(fā)病，死亡率一般很低。產(chǎn)蛋雞感染通常變現(xiàn)產(chǎn)蛋量降低，蛋的品質(zhì)下降。本病廣泛流行于世界各地，是養(yǎng)雞業(yè)的重要疫病。
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