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小鼠前列腺素E2(PGE2)ELISA試劑盒 試劑準備
在臨床實驗室,對試劑準備一般不太注意,通常的做法是,在實驗時將試劑從冰箱中拿出來即用,而忽略了這種做法有可能影響后面溫育時間不夠的問題,其直接的后果是對一些弱陽性標本的檢測出現(xiàn)假陰性。因此在ELISA測定中試劑的準備zui為關鍵的是,在實驗開始前,將試劑盒先從冰箱中拿出來,在室溫下放置20分鐘以上后,再進行測定,以使試劑盒在使用前與室溫平衡。這樣做的目的,主要是為了在后面的溫育反應步驟中,能使反應微孔內(nèi)的溫度能較快地達到所要求的高度,以滿足測定要求。其次,目前的商品ELISA試劑盒中的洗板液均需在實驗室使用時對所提供的濃縮液稀釋配制,因此稀釋時所用的蒸餾水或去離子水應保證質(zhì)量。此外,當試劑盒以OPD為底物時,則底物溶液應在反應顯色前臨時配制。
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臨床ELISA測定按其表示測定結果的方式分為定性和定量測定兩大類。定性測定只是對標本中是否含有待測抗原或抗體作出“有”或“無”的結論,分別用“陽性”和“陰性”來表示??梢姸ㄐ詼y定通常是用于傳染性病原體的抗原或抗體的測定,以判斷特定病原體感染的存在與否。而定量測定則是對標本中待測抗原的多少進行量值測定,以具體數(shù)值表示。定量測定基本上是用于非病原體抗原物質(zhì)的測定,如激素、細胞因子、腫瘤標志物、小分子藥物等。目前國內(nèi)在臨床上應用的ELISA試劑盒絕大部份是用于傳染性病原體的抗原或抗體的定性測定,也有少部份用于αFP、hCG、細胞因子等的定量測定。ELISA定性測定的“陽性”和“陽性”的判定依據(jù)是試劑盒所確定的陽性判定值(Cut-off)。定量測定的“量值”依據(jù)是試劑盒中所帶標準品同時測定得出的劑量反應曲線(又稱標準曲線)。有關ELISA定性和定量測定結果的數(shù)據(jù)處理后面將有專門章節(jié)討論。本處只想強調(diào)的一點是,ELISA定性測定的“陰性”和“陽性”結果的判定依據(jù)只能是試劑盒本身所確定的Cut-off值,而不能以衛(wèi)生部臨床檢驗中心供應弱陽性定值質(zhì)控血清。為什么要強調(diào)這一點呢?主要是因為以前有很多基層實驗室均使用部中心供應的弱陽性定值質(zhì)控血清(以前也稱“臨界值”血清)的測定吸光度來判定結果,高于其判為陽性,反之為陰性,而不管試劑盒Cut-off值為何。到目前為止,仍有一些實驗室在堅持這種錯誤的做法。試劑盒的Cut-off值的設立是建立在一系列科學試驗及統(tǒng)計學研究的基礎上的(詳見后述),而部中心供應的弱陽性定值質(zhì)控血清主要是供臨床實驗室進行室內(nèi)質(zhì)控時使用。
下面再解釋一下在ELISA定性測定結果判定中常用的一些縮寫。
?。?)S/CO:其中S為Sample(樣本)或Specimen(標本)的簡寫,表示的是標本測定的吸光度值,CO為Cut-off值的簡寫。除競爭抑制法外,其它ELISA定性測定模式中,當S/CO值大于或等于1時,標本的測定為陽性,小于1時為陰性。
?。?)S/N或P/N:其中S同(1),N為Negative(陰性對照)的簡寫,P為Patient(患者)的簡寫。較早的試劑盒很多都使用S/N或P/N≥2.1為陽性判定標準,現(xiàn)仍有一些試劑盒使用這種方式。這種方式與S/CO方式無根本性區(qū)別,只不過是前者將陰性對照(N)的2.1倍視為Cut-off值而已。
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