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貨號 | 產(chǎn)品名稱 | 規(guī)格 |
AS632119 | 胞漿異檸檬酸脫氫酶（ICDHc）測試盒 | 100管/96樣 |
AS632119 | 胞漿異檸檬酸脫氫酶（ICDHc）測試盒 | 50管/48樣 |
正式測定前務(wù)必取2-3個預(yù)期差異較大的樣本做預(yù)測定
測定意義：
ICDHc（EC 1.1.1.42）廣泛存在于動物、植物、微生物和培養(yǎng)細(xì)胞中，催化異檸檬酸脫氫脫羧生成 α-酮戊二酸，同時還原NADP+生成NADPH。ICDHc是細(xì)胞質(zhì)中除了磷酸戊糖途徑外又一種NADPH重要來源，在逆境中該酶活性通常會發(fā)生顯著變化。
測定原理：
利用ICDHc催化NADP+還原成NADPH反應(yīng)，在340 nm下測定NADPH濃度的增加。
所需的儀器和用品:
紫外分光光度計/酶標(biāo)儀、恒溫水浴鍋、臺式離心機、可調(diào)式移液器、微量石英比色皿/96孔板、研缽、冰和蒸餾水。
試劑的組成和配制：
提取液：液體100mL×1瓶，4℃保存；
試劑一：液體19 mL×1瓶，4℃保存；
試劑二：粉劑×1瓶，4℃保存；
試劑三：粉劑×1瓶，-20℃保存；
樣本的前處理：
1、細(xì)菌、細(xì)胞或組織樣品的制備：
細(xì)菌或培養(yǎng)細(xì)胞：先收集細(xì)菌或細(xì)胞到離心管內(nèi)，離心后棄上清；按照細(xì)菌或細(xì)胞數(shù)量（104個）：提取液體積（mL）為500~1000：1的比例（建議500萬細(xì)菌或細(xì)胞加入1mL提取液），超聲波破碎細(xì)菌或細(xì)胞（冰浴，功率20％或200W，超聲3s，間隔10s，重復(fù)30次）；8000g 4℃離心10min，取上清，置冰上待測。
組織：按照組織質(zhì)量（g）：提取液體積(mL)為1：5~10的比例（建議稱取約0.1g組織，加入1mL提取液），進(jìn)行冰浴勻漿。8000g 4℃離心10min，取上清，置冰上待測。
2、血清（漿）樣品：直接檢測。
測定步驟：
分光光度計或酶標(biāo)儀預(yù)熱30min以上，調(diào)節(jié)波長至340nm，蒸餾水調(diào)零。
將試劑二和試劑三轉(zhuǎn)移至試劑一中充分溶解；在37℃（哺乳動物）或25℃（其它物種）水浴10min以上；用不完的試劑分裝后-20℃保存，禁止反復(fù)凍融。
3、 在微量石英比色皿或96孔板中加入10μL樣本和190μL試劑一，混勻后立即記錄340nm處20s后吸光值A(chǔ)1和 2min20s后的吸光值A(chǔ)2，計算ΔA=A2-A1。
注意事項：
若A2-A1大于0.5，需將酶液用提取液稀釋，使A2-A1小于0.5，可提高檢測靈敏度。計算公式中乘以相應(yīng)稀釋倍數(shù)。
若A2-A1小于0.005，可延長反應(yīng)時間到5min或10min。
ICDHc活力單位的計算：
a.用微量石英比色皿測定的計算公式如下
1、血清（漿）ICDHc活力的計算:
單位的定義：每mL血清（漿）每分鐘生成1 nmol NADPH定義為一個酶活力單位。
ICDHc（nmol/min/mL）＝[ΔA×V反總÷（ε×d）×109]÷V樣÷T=1608×ΔA
2、組織、細(xì)菌或細(xì)胞中ICDHc活力的計算:
（1）按樣本蛋白濃度計算：
單位的定義：每mg組織蛋白每分鐘生成1 nmol NADPH定義為一個酶活力單位。
ICDHc（nmol/min/mg prot）=[ΔA×V反總÷（ε×d）×109]÷(V樣×Cpr) ÷T=1608×ΔA÷Cpr
（2）按樣本鮮重計算：
單位的定義：每g組織每分鐘生成1 nmol NADPH定義為一個酶活力單位。
ICDHc（nmol/min/g 鮮重）＝[ΔA×V反總÷（ε×d）×109]÷(W× V樣÷V樣總) ÷T=1608×ΔA÷W
（3） 按細(xì)菌或細(xì)胞密度計算：
單位的定義：每1萬個細(xì)菌或細(xì)胞每分鐘生成1 nmol的NADPH定義為一個酶活力單位。
ICDHc（nmol/min/104）=[ΔA×V反總÷（ε×d）×109]÷(500×V樣÷V樣總) ÷T=3.216×ΔA
V反總：反應(yīng)體系總體積，2×10-4 L；ε：NADPH摩爾消光系數(shù)，6.22×103 L / mol /cm；d：比色皿光徑，1cm；V樣：加入樣本體積，0.01 mL；V樣總：加入提取液體積，1 mL；T：反應(yīng)時間，2 min；Cpr：樣本蛋白質(zhì)濃度，mg/mL；W：樣本質(zhì)量，g；500：細(xì)菌或細(xì)胞總數(shù)，500萬。
b.用96孔板測定的計算公式如下
1、血清（漿）ICDHc活力的計算：
單位的定義：每mL血清（漿）每分鐘生成1 nmol NADPH定義為一個酶活力單位。
ICDHc（nmol/min/mL）＝[ΔA×V反總÷（ε×d）×109]÷V樣÷T=3216×ΔA
2、組織、細(xì)菌或細(xì)胞中ICDHc活力的計算：
（1）按樣本蛋白濃度計算：
單位的定義：每mg組織蛋白每分鐘生成1 nmol NADPH定義為一個酶活力單位。
ICDHc（nmol/min/mg prot）=[ΔA×V反總÷（ε×d）×109]÷(V樣×Cpr) ÷T=3216×ΔA÷Cpr
（2）按樣本鮮重計算：
單位的定義：每g組織每分鐘生成1 nmol NADPH定義為一個酶活力單位。
ICDHc（nmol/min/g 鮮重）＝[ΔA×V反總÷（ε×d）×109]÷(W× V樣÷V樣總) ÷T=3216×ΔA÷W
（3） 按細(xì)菌或細(xì)胞密度計算：
單位的定義：每1萬個細(xì)菌或細(xì)胞每分鐘生成1 nmol的NADPH定義為一個酶活力單位。
ICDHc（nmol/min/104）=[ΔA×V反總÷（ε×d）×109]÷(500×V樣÷V樣總) ÷T=6.432×ΔA
V反總：反應(yīng)體系總體積，2×10-4 L；ε：NADPH摩爾消光系數(shù)，6.22×103 L / mol /cm；d：96孔板光徑，0.5cm；V樣：加入樣本體積，0.01 mL；V樣總：加入提取液體積，1 mL；T：反應(yīng)時間，2 min；Cpr：樣本蛋白質(zhì)濃度，mg/mL；W：樣本質(zhì)量，g；500：細(xì)菌或細(xì)胞總數(shù)，500萬。
公司正在出售的產(chǎn)品：
LMWH ELISA Kit | 3',5'-二磷suan核苷suanmei1ELISA試劑盒 |
anti-cyclic citrullinated peptide，CCP ELISA Kit | AN1-型鋅指域蛋白6ELISA試劑盒 |
Ⅷ型膠原α1ELISA試劑盒 | B細(xì)胞κ輕肽基因增強子核因子抑制因子εELISA試劑盒 |
ATPmeiELISA試劑盒 | Cullin1蛋白ELISA試劑盒 |
大鼠巨噬細(xì)胞集落刺激因子(M-CSF)ELISA Kit | 大鼠8羥基脫氧鳥苷(8-OHdG) ELISA Kit |
17-β-羥基類固醇脫氫mei3ELISA試劑盒 | 豬白介su1β(IL-1β)ELISA檢測試劑盒 |
人糖基化依賴的細(xì)胞黏附分子(GlyCAM-1)elisa試劑盒 | CD10分子ELISA試劑盒 |
豬食欲su/阿立新B(OX-B)試劑盒ELISA | 海豚鏈球菌PCR試劑盒 |
桿狀巴爾通體PCR試劑盒 | 委內(nèi)瑞拉馬腦脊髓炎病毒PCR檢測試劑盒 |
反芻獸曼氏桿菌PCR試劑盒 | 梭狀芽孢桿菌屬通用PCR試劑盒 |
曼氏桿菌通用PCR檢測試劑盒PCR檢測試劑盒 | 狗源性成分PCR試劑盒 |
蛙病毒PCR檢測試劑盒 | TRH 大鼠促甲狀腺su釋放激suELISA檢測試劑盒 |
ATP結(jié)合盒轉(zhuǎn)運蛋白A1(ABCA1)ELISA試劑盒 | 剛地弓形蟲PCR檢測試劑盒 |
Atlastin2蛋白(ATL2)ELISA試劑盒 | 偽結(jié)核棒桿菌PCR試劑盒 |
胰脂肪(PL)ELISA試劑盒 | ASMA 小鼠抗平滑肌抗體ELISA檢測試劑盒 |
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