Pierce 蛋白 G 瓊脂糖的特點(diǎn):
?蛋白 G—固定化蛋白 G 適用于從小鼠、人、牛、山羊和綿羊血清中純化多克隆 IgG(包括人 IgG3 和小鼠 IgG1 同種型)
? 瓊脂糖樹脂—支持物為交聯(lián) 6% 微珠狀瓊脂糖 (CL-6B),這是蛋白親和純化方法的較常用樹脂
? 惰性且穩(wěn)定—的生產(chǎn)方法通過不帶電荷的抗浸出性共價(jià)鍵固定蛋白 G,因此非特異性結(jié)合較低且能夠多次使用而不降低得率
? 標(biāo)準(zhǔn)容量— Pierce 蛋白 G 瓊脂糖包含正常上樣量的固定化蛋白 G,提供 11–15 mg 人 IgG/mL 樹脂的結(jié)合容量
Pierce 蛋白 G 瓊脂糖包含共價(jià)固定至高質(zhì)量交聯(lián) 6% 微珠狀瓊脂糖 (CL-6B) 上的重組蛋白 G。該特殊種類的親和樹脂可提供通用的色譜特點(diǎn)組合,用于從哺乳動物血清樣品中獲得高得率的全 IgG 和對全 IgG 進(jìn)行高純度純化。瓊脂糖微珠的物理和化學(xué)特性適用于許多親和純化系統(tǒng)。
蛋白 G 是源自 G 群鏈球菌的細(xì)菌細(xì)胞壁蛋白,現(xiàn)可在大腸桿菌中以重組形式生產(chǎn)。與蛋白A相同,蛋白G可與大多數(shù)哺乳動物的免疫球蛋白結(jié)合,結(jié)合部位主要為其Fc區(qū)。天然蛋白G包含兩個(gè)免疫球蛋白結(jié)合位點(diǎn)以及白蛋白和細(xì)胞表面結(jié)合位點(diǎn)。重組形式的蛋白G中已除去這些白蛋白及細(xì)胞表面結(jié)合位點(diǎn),以減少免疫球蛋白純化過程中的非特異性結(jié)合。重組蛋白G分子量約為21.6kDa,但在SDS-PAGE中表觀大小為31至34kDa。IgG 結(jié)合功能在 pH 值為 5 時(shí)較佳,但在近中性條件(pH 值 7.0 至 7.2)下也可高效結(jié)合。
與蛋白 A 相比,蛋白 G 可與人、小鼠和大鼠血清中更廣泛的 IgG 亞類結(jié)合。其中,除了與蛋白A一樣能夠結(jié)合其他類型免疫球蛋白之外,蛋白G還對人IgG3、小鼠IgG1和大鼠的全部三種IgG亞型具有特別強(qiáng)的結(jié)合能力。因此,在涉及這些物種和抗體亞型的應(yīng)用中一般建議采用蛋白G。關(guān)于其他物種,蛋白 G 對牛、山羊和綿羊 IgG 的結(jié)合能力更強(qiáng),但對豬、豚鼠、犬和貓 IgG 的結(jié)合能力弱于蛋白 A。
Pierce 蛋白 G 瓊脂糖使用 Thermo Scientific AminoLink 偶聯(lián)化學(xué)法制備,該方法與傳統(tǒng)配體固定方法相比具有多項(xiàng)優(yōu)勢。AminoLink 固定后,瓊脂糖珠的糖單體與蛋白 A 上的天然賴氨酸殘基通過簡單的酰胺鍵結(jié)合。與典型的溴化氰 (CNBr) 固定法不同,AminoLink 方法不引入任何新的化學(xué)基團(tuán),從而避免了可能導(dǎo)致的非特異性結(jié)合,并且形成基本不可逆的穩(wěn)定結(jié)合。所得的高結(jié)合能力樹脂在多輪抗體純化之后仍然能保留功能性固定化蛋白 G。
Pierce 蛋白 G 瓊脂糖可從許多哺乳動物物種的血清和其他液體中有效地親和純化 IgG。除了來自人、山羊和綿羊樣品的大多數(shù) IgG 同種型外,蛋白 G 還特別適用于與小鼠抗體(包括 IgG1)配合使用。
交聯(lián) 6% 微珠狀瓊脂糖 (CL-6B) 的特性:
?支持 pH 值穩(wěn)定性:2 至 14(短期);3 至 13(長期)
? 平均粒徑:45 至 165 微米
? 排阻極限:10,000至4,000,000 道爾頓
?體積流速:約1 mL/分鐘(對于1 cm 直徑柱)
?線性速度:30 cm/h
? 壓力:低于 25psi (1.5 bar);定義為樹脂可承受的跨色譜柱壓降(注:液相色譜裝置的指示表壓可能測量的是總系統(tǒng)壓力,而不是跨色譜柱壓降。)
更多產(chǎn)品數(shù)據(jù)
? 使用抗體結(jié)合蛋白進(jìn)行抗體純化