環(huán)磷酸鳥苷(cGMP)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法)
特異性
本試劑盒用于檢測環(huán)磷酸鳥苷(cGMP)，經(jīng)檢測與其它相似物質(zhì)無明顯交叉反應(yīng)。
由于受到技術(shù)及樣本來源的限制，不可能完成對所有相關(guān)或相似物質(zhì)交叉反應(yīng)檢測，因此本試劑盒有可能與未經(jīng)檢測的其它物質(zhì)有交叉反應(yīng)。
回收率
分別于定值血清及血漿樣本中加入一定量的環(huán)磷酸鳥苷(cGMP)（加標樣品），重復(fù)測定并計算其均值，回收率為測定值與理論值的比率。
| 樣本 | 回收率范圍(%) | 平均回收率(%) |
| serum(n=5) | 82-98 | 91 |
| EDTA plasma(n=5) | 94-102 | 99 |
| heparin plasma(n=5) | 86-98 | 92 |
精密度
精密度用樣品測定值的變異系數(shù)CV表示。CV(%) = SD/mean×100
批內(nèi)差：取同批次試劑盒對低、中、高值定值樣本進行定量檢測,每份樣本連續(xù)測定20 次，分別計算不同濃度樣本的平均值及SD值。
批間差：選取3個不同批次的試劑盒分別對低、中、高值定值樣本進行定量測定，每個樣本使用同一試劑盒重復(fù)測定8次，分別計算不同濃度樣本的平均值及SD值。
批內(nèi)差： CV<10%
批間差： CV<12%
線性
在定值血清及血漿樣本內(nèi)加入適量的環(huán)磷酸鳥苷(cGMP)，并倍比稀釋成1:2，1:4，1:8，1:16的待測樣本，線性范圍即為稀釋后樣本中環(huán)磷酸鳥苷(cGMP)含量的測定值與理論值的比率。
| 樣本 | 1:2 | 1:4 | 1:8 | 1:16 |
| serum(n=5) | 79-102% | 80-96% | 96-103% | 93-101% |
| EDTA plasma(n=5) | 79-96% | 90-103% | 85-101% | 78-91% |
| heparin plasma(n=5) | 80-98% | 94-105% | 86-94% | 95-102% |
穩(wěn)定性
經(jīng)測定，試劑盒在有效期內(nèi)按推薦溫度保存，其活性降低率小于5%。
為減小外部因素對試劑盒破壞前后檢測值的影響，實驗室的環(huán)境條件需盡量保持一致，尤其是實驗室內(nèi)溫度、濕度及溫育條件。其次由同一實驗員來進行操作可減少人為誤差。
實驗流程
1. 實驗前標準品、試劑及樣本的準備；
2. 加樣（標準品及樣本）50µL，
加入50µL檢測液A(臨用前配制);
37°C溫育1小時。
3. 洗板3次；
4. 加檢測溶液B100µL，37°C孵育30分鐘；
5. 洗板5次；
6. 加TMB底物90µL，37°C孵育10-20分鐘；
7. 加終止液50µL，立即450nm讀數(shù)。
實驗原理
本試劑盒應(yīng)用競爭抑制酶聯(lián)免疫分析法測定標本中待測物質(zhì)水平。將環(huán)磷酸鳥苷(cGMP)單克隆抗體包被微孔板，制成固相載體，往包被抗體的微孔中同時加入生物su標記的抗原和待測抗原(標準品或樣本)，待測抗原與生物su標記抗原對特異性抗體進行競爭結(jié)合。溫育后經(jīng)洗滌去掉未結(jié)合物，然后加入HRP標記的親和素，經(jīng)過溫育和洗滌后加入底物TMB顯色。TMB在過氧化物酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍色，并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成最終的黃色。待測標本濃度越高，標記抗原和抗體的結(jié)合就越受到抑制，顯色愈淺。顯色的深淺與酶量呈正相關(guān)，而與樣品中待測物質(zhì)含量呈負相關(guān)。用酶標儀在450nm波長下測定吸光度（O.D.值），計算樣品濃度。
參考文獻
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注：產(chǎn)品僅用于科研
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