蛋白穩(wěn)定性分析儀

PR 系列蛋白穩(wěn)定性分析儀

生物制品的開(kāi)發(fā)過(guò)程漫長(zhǎng)而復(fù)雜，從候選分子到最終變成產(chǎn)品都需要檢測(cè)一系列重要參數(shù)作為支持。從上游篩選、構(gòu)建或改造候選分子，到制劑優(yōu)化、可開(kāi)發(fā)性評(píng)估，以及下游生產(chǎn)工藝優(yōu)化，PR Panta 都可以始終如一地為候選分子提供全面的參數(shù)穩(wěn)定性表征和可信賴(lài)的結(jié)果，精準(zhǔn)比較不同團(tuán)隊(duì)和不同批次樣品的構(gòu)象與膠體穩(wěn)定性數(shù)據(jù)時(shí)保持一致性。

產(chǎn)品優(yōu)勢(shì)：

【同時(shí)且實(shí)時(shí)】：實(shí)現(xiàn)在整個(gè)升溫過(guò)程中實(shí)時(shí)監(jiān)測(cè)和記錄，同時(shí)提供構(gòu)象穩(wěn)定性、粒徑及聚集數(shù)據(jù)，并在結(jié)構(gòu)域水平上獲得全面且完整的穩(wěn)定性信息；

【超高分辨率】：誤差值在±0.008的高分辨率，檢測(cè)多個(gè)熱變性時(shí)可有效區(qū)分具有相似Tm的結(jié)構(gòu)域，彌補(bǔ)由于監(jiān)測(cè)技術(shù)瓶頸而忽略掉的關(guān)鍵信息；

【高特異性】：可有效區(qū)分生物制劑信號(hào)與緩沖液或細(xì)胞間質(zhì)信號(hào)；

【數(shù)據(jù)精準(zhǔn)、重復(fù)性好】：Tm誤差范圍僅為±0.1℃，提供真實(shí)的檢測(cè)結(jié)果；

【通量靈活、操作簡(jiǎn)便】：無(wú)論是上游制劑開(kāi)發(fā)還是下游工藝優(yōu)化，無(wú)論濃度高低，一臺(tái)Panta即可滿(mǎn)足整個(gè)流程的穩(wěn)定性檢測(cè)需求，節(jié)約成本和時(shí)間。

實(shí)體參數(shù)：

可以讓您在單次運(yùn)行中測(cè)量熱穩(wěn)定性，聚集，粒徑大小和分散性- 無(wú)標(biāo)記檢測(cè)，僅需使用微量樣品。依靠 Prometheus 獲得可靠的、高分辨率的蛋白質(zhì)穩(wěn)定性數(shù)據(jù)，檢測(cè)出不易被發(fā)現(xiàn)的穩(wěn)定性行為， 讓您對(duì)目標(biāo)候選分子和條件都更加充滿(mǎn)信心。

 • 超高分辨率的生物物理檢測(cè)方法：通過(guò)了解影響蛋白穩(wěn)定性的溫度和化學(xué)條件，對(duì)蛋白功能進(jìn)行更深入的剖析，從而全面了解蛋白質(zhì)的折疊特性和結(jié)構(gòu)域。使用 PR 系列蛋白穩(wěn)定性分析儀，輕松改善蛋白純化工作流程，快速排查各種生物制劑功能研究中的問(wèn)題。

 • 全面檢測(cè)：快速測(cè)定不同緩沖液、鹽濃度、pH 和離子對(duì)蛋白質(zhì)熱變性的影響。確定不同批次實(shí)驗(yàn)之間的相似性。

 • 優(yōu)化儲(chǔ)存和制劑條件：精確測(cè)定不同貯藏條件對(duì)蛋白質(zhì)穩(wěn)定性的影響。確定有效制劑條件，確保蛋白穩(wěn)定性。

 • 預(yù)測(cè)聚集：輕松預(yù)測(cè)蛋白聚集趨勢(shì)，更全面地了解影響蛋白質(zhì)穩(wěn)定性的各類(lèi)因素。

1. 技術(shù)優(yōu)勢(shì)

（1）天然條件下檢測(cè)：無(wú)需添加染料或改變樣品緩沖液?？蓹z測(cè)粘稠樣品。

（2）樣品準(zhǔn)備：樣品直接吸入毛細(xì)管，上樣極簡(jiǎn)單。

（3）數(shù)據(jù)精準(zhǔn)：高密度的數(shù)據(jù)點(diǎn)意味著高質(zhì)量的數(shù)據(jù)，其他技術(shù)遺漏的細(xì)節(jié)我們卻可以得到。

（4）同步測(cè)量：同步得到 Tm、Tonset 和 Tturbidity 等多個(gè)實(shí)驗(yàn)結(jié)果。

（5）樣品消耗少：10 μL 樣品量 ，濃度 5 μg/mL 即可檢測(cè)。

（6）檢測(cè)更多條件：一次測(cè)試得到多個(gè)參數(shù)，使您更快獲得結(jié)果。

（7）通量選擇自由：靈活的樣品數(shù)量，一次實(shí)驗(yàn)可做 1 個(gè)、48個(gè)或任意數(shù)量的樣品，也可以選擇全自動(dòng)上樣。

2. 技術(shù)原理

（1）微量差示掃描熒光技術(shù) (nanoDSF)

PR 系列基于微量差示掃描熒光技術(shù) (nanoDSF) 技術(shù)，可在天然條件下檢測(cè)蛋白熱變性和化學(xué)變性。蛋白中色AN酸和LUO氨酸的熒光與其所處的環(huán)境密切相關(guān)。免標(biāo)記的 nanoDSF 技術(shù)可以準(zhǔn)確檢測(cè)蛋白熱變性和化學(xué)變性過(guò)程中內(nèi)源熒光的變化。因此，通過(guò)檢測(cè)熒光變化，可實(shí)現(xiàn)在非標(biāo)記環(huán)境下測(cè)定蛋白的熱穩(wěn)定性或化學(xué)穩(wěn)定性。更重要的是，數(shù)據(jù)質(zhì)量不會(huì)受樣品聚集影響。高質(zhì)量的數(shù)據(jù)助您做出更好的決定。

PR 系列是通過(guò)檢測(cè)蛋白的內(nèi)源性熒光來(lái)跟蹤其折疊狀態(tài)。熒光信號(hào)的比值會(huì)隨著溫度的增加或化學(xué)變性劑濃度的增加 而變化，從而測(cè)定蛋白穩(wěn)定性參數(shù) Tm值。

（2）背反射技術(shù)（Backreflection）

NanoTemper 公司研發(fā)的背反射光學(xué)模塊主要用于檢測(cè)蛋白的聚集現(xiàn)象。 蛋白的聚集檢測(cè)主要基于顆粒的光散射效應(yīng)。歸功于 PR 系列產(chǎn)品使用的高精度毛細(xì)管和自動(dòng)化的內(nèi)部參比，聚集檢測(cè)的重復(fù)性和靈敏性均優(yōu)于傳統(tǒng)方式。同時(shí)，由雙通道 UV (Dual - UV Technologies) 檢測(cè)模塊獲得的高密度數(shù)據(jù)能夠同步監(jiān)測(cè)蛋白的去折疊過(guò)程。熱穩(wěn)定性和聚集起始溫度的同步檢測(cè)，能非常快速的給您夠提供精確、信息全面的蛋白穩(wěn)定性分析數(shù)據(jù)。

（3）動(dòng)態(tài)光散射技術(shù)（DLS）

用于檢測(cè)水力學(xué)半徑，均一性以及自相互作用 KD 

圖 1：激光 (紫色虛線(xiàn)) 被溶液中的粒子所散射，散射光（紫色波浪線(xiàn)）被用于檢測(cè)粒子的布朗運(yùn)動(dòng)。 

圖 2 ：儀器采集散射光強(qiáng)度隨時(shí)間的波動(dòng)，較小的粒子擴(kuò)散得更快，導(dǎo)致波動(dòng)強(qiáng)度比較大的粒子更大。因此， 散射光強(qiáng)度的波動(dòng)可用于提取擴(kuò)散系數(shù)和計(jì)算粒子尺寸。 

圖 3：自相關(guān)函數(shù)描述了一個(gè)粒子在一段時(shí)間內(nèi)在同一位置被發(fā)現(xiàn)的概率 (用 Tau 表示 )。當(dāng)較大的粒子經(jīng) 歷較慢的布朗運(yùn)動(dòng)時(shí)，它們的自相關(guān)函數(shù)經(jīng)歷較慢的衰減，而較小、較快的粒子的自相關(guān)函數(shù)衰減得更快。 

圖 4：擬合自相關(guān)函數(shù)來(lái)確定擴(kuò)散系數(shù) D，并代入 Stokes-Einstein 方程。該方程與粒子的大小 (半徑) 和擴(kuò) 散系數(shù)有關(guān)，由此可以確定溶液中粒子的大小。

 （4）靜態(tài)光散射技術(shù)（SLS）

與動(dòng)態(tài)光散射不同，靜態(tài)光散射檢測(cè)的是溶液中所有粒子的平均散射光強(qiáng)度 , 計(jì)算樣品的分子量以及第二維里系數(shù) B22。

3. 簡(jiǎn)單、靈活的分析軟件

Prometheus Panta 配備了 Panta Control，Panta AutoControl 及 Panta Analysis 三個(gè)軟件，助您輕松完成多參數(shù)蛋白穩(wěn)定性分析。您可通過(guò) Panta Control 軟件在一次升溫過(guò)程中同時(shí)且實(shí)時(shí)檢測(cè)樣品的Tm 、Tonset、Tturbidity、Tsize 和 Tscattering，單獨(dú)運(yùn)行光散射模塊進(jìn)行自相互作用分析，通過(guò)化學(xué)變性實(shí)驗(yàn)檢測(cè)樣品去折疊的自由能 ΔG 或進(jìn) 行加速實(shí)驗(yàn)。Panta AutoControl 軟件可幫您完成 1356 個(gè)樣品的自動(dòng)化篩選。Panta Analysis 軟件可進(jìn)行重復(fù)樣品的統(tǒng)計(jì)分析以及數(shù)據(jù)疊加呈現(xiàn)。您可自定義所需呈現(xiàn)的檢測(cè)參數(shù)，設(shè)定模板進(jìn)行標(biāo)準(zhǔn)化分析并批量導(dǎo)出數(shù)據(jù)。

4. 典型應(yīng)用

（1）抗體可開(kāi)發(fā)性評(píng)估

（2）可比性研究

（3）多參數(shù)高通量制劑篩選

（4）化學(xué)變性實(shí)驗(yàn)

（5）高濃度樣品聚集預(yù)測(cè)-DLS

（6）高濃度樣品聚集預(yù)測(cè)-SLS

（7）片段化合物庫(kù)篩選

（8）結(jié)合分枝桿菌延伸因子藥物篩選

（9）蛋白液 - 液相分離藥物開(kāi)發(fā)

（10）核苷酸糖轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白底物調(diào)控機(jī)制

（11）酶庫(kù)高通量篩選

（12）高通量膜蛋白去垢劑篩選