跨膜電阻實(shí)時(shí)無(wú)標(biāo)記細(xì)胞動(dòng)態(tài)分析儀
應(yīng)用領(lǐng)域:
☆ 細(xì)胞屏障(血腦屏障、鼻黏膜及消化道屏障等)的特性
☆ 上皮細(xì)胞、內(nèi)皮細(xì)胞、貼壁細(xì)胞等的跨膜電阻測(cè)量
☆ 緊密連接動(dòng)力學(xué)
☆ 新型藥物研發(fā)
☆ 藥物或毒物對(duì)細(xì)胞屏障功能的影響
☆ 腫瘤侵襲轉(zhuǎn)移
☆ 免疫細(xì)胞在中樞神經(jīng)系統(tǒng)疾病中的作用
設(shè)備特點(diǎn):
☆ 不干擾細(xì)胞正常生長(zhǎng)環(huán)境--測(cè)量的數(shù)值更加真實(shí)
☆ 超長(zhǎng)時(shí)間全自動(dòng)實(shí)時(shí)分析--測(cè)量的數(shù)據(jù)更加完整
☆ 測(cè)量采用更寬的頻率范圍--擬合的數(shù)據(jù)更加精確
☆ 構(gòu)建的數(shù)理模型更加細(xì)致--電生理參數(shù)更加豐富
☆ 可兼容多種類型培養(yǎng)插件--耗材選擇更加多樣化
基本參數(shù):
☆ 可以直接讀取細(xì)胞屏障層的電阻值TEER (Ω.cm2);
☆ *兼容常用廠家的Transwell細(xì)胞培養(yǎng)皿。包括BD,Biosciences,Corning,Bio-One,Millipore等。無(wú)儀器自帶耗材和其他額外耗材;
☆ 細(xì)胞模塊可以同時(shí)容納6/24/48/72/96個(gè)培養(yǎng)皿。每個(gè)培養(yǎng)皿都有三種型號(hào)可選:小孔型(“24孔"型Transwell培養(yǎng)皿),中孔型(“12孔"型Transwell培養(yǎng)皿),大孔型(“6孔"型Transwell培養(yǎng)皿);
☆ cellZscope細(xì)胞模塊是放置于標(biāo)準(zhǔn)的細(xì)胞培養(yǎng)箱中,實(shí)時(shí)動(dòng)態(tài)監(jiān)測(cè),可以監(jiān)測(cè)數(shù)秒到數(shù)周的細(xì)胞動(dòng)態(tài)生物學(xué)行為變化。
技術(shù)原理:
表皮或內(nèi)皮細(xì)胞之間通過(guò)緊密連接形成一層具選擇性的細(xì)胞屏障,細(xì)胞屏障不僅控制鄰近細(xì)胞間間隙對(duì)各種溶解物的擴(kuò)散滲透率,而且調(diào)控跨細(xì)胞物質(zhì)轉(zhuǎn)運(yùn)。細(xì)胞屏障的存在一方面保護(hù)了機(jī)體免受有害物質(zhì)的傷害,另一方面也限制了治療性藥物的進(jìn)入。
細(xì)胞屏障的通透性可以通過(guò)跨膜電阻(即TEER,Transepithelial resistance)來(lái)反映,細(xì)胞屏障的通透性與跨膜電阻TEER之間的關(guān)系為:通透性越高TEER越低,反之亦然
4種不同型號(hào)可供選擇:cellZscopeE、cellZscope+、cellZscope2、cellZscope3
cellZscopeE
☆ 入門(mén)級(jí)的cellZscopeE型號(hào)更靈活,如果您沒(méi)有較高的通量檢測(cè),可以選擇cellZscopeE
☆ 多達(dá)6個(gè)通道的TER檢測(cè)
☆ 細(xì)胞培養(yǎng)環(huán)境下實(shí)時(shí)長(zhǎng)時(shí)間檢測(cè)
☆ 可以兼容多種transwell小室
☆ 操作簡(jiǎn)單,清洗方便
cellZscope2
☆ cellZscope2型號(hào)為基于阻抗的細(xì)胞監(jiān)測(cè)提供了一些全新的體驗(yàn)
☆ 在時(shí)間分辨率達(dá)到了新的高性能基準(zhǔn)。多通道數(shù)據(jù)采集使cellZscope2提供了快速、*的阻抗輸出
☆ 特殊的易用性,更換培養(yǎng)基等細(xì)胞培養(yǎng)常規(guī)操作,無(wú)需插拔數(shù)據(jù)線,數(shù)據(jù)穩(wěn)定性更高
☆ cellZscope2更快的性能允許更高的吞吐量。在實(shí)驗(yàn)前,實(shí)驗(yàn)中和實(shí)驗(yàn)后,方便細(xì)胞模塊與控制模塊的數(shù)據(jù)對(duì)接
cellZscope2
☆ cellZscope2型號(hào)為基于阻抗的細(xì)胞監(jiān)測(cè)提供了一些全新的體驗(yàn)
☆ 在時(shí)間分辨率達(dá)到了新的高性能基準(zhǔn)。多通道數(shù)據(jù)采集使cellZscope2提供了快速、*的阻抗輸出
☆ 特殊的易用性,更換培養(yǎng)基等細(xì)胞培養(yǎng)常規(guī)操作,無(wú)需插拔數(shù)據(jù)線,數(shù)據(jù)穩(wěn)定性更高
☆ cellZscope2更快的性能允許更高的吞吐量。在實(shí)驗(yàn)前,實(shí)驗(yàn)中和實(shí)驗(yàn)后,方便細(xì)胞模塊與控制模塊的數(shù)據(jù)對(duì)接
cellZscope3
☆ 四個(gè)細(xì)胞模塊,每個(gè)有24個(gè)孔,可以連接到一個(gè)cellZscope3控制器,同時(shí)測(cè)量96個(gè)孔
☆ 自動(dòng)化的,快速的全程監(jiān)控,獲得數(shù)天或數(shù)周的長(zhǎng)期監(jiān)測(cè)數(shù)據(jù)
☆ 特殊的易用性,更換培養(yǎng)基等細(xì)胞培養(yǎng)常規(guī)操作,無(wú)需插拔數(shù)據(jù)線,數(shù)據(jù)穩(wěn)定性更高
☆ 時(shí)間分辨率高:cellZscope3每30秒完成單個(gè)細(xì)胞模塊即24孔的檢測(cè)
應(yīng)用案例:
跨膜電阻實(shí)時(shí)無(wú)標(biāo)記細(xì)胞動(dòng)態(tài)分析儀可以檢測(cè)Caco-2細(xì)胞屏障的完整性
用跨膜電阻(TEER)值法檢測(cè)Caco-2細(xì)胞屏障的完整性。Caco-2細(xì)胞以5×103細(xì)胞/孔的密度接種于Transwell小室中。一周每隔一天更換一次新鮮培養(yǎng)基,然后在接下來(lái)的兩周每天更換一次新鮮培養(yǎng)基。并使用NanoAnalytics公司 Cellzscope2軟件對(duì)所得實(shí)時(shí)數(shù)據(jù)進(jìn)行分析。
Caco-2細(xì)胞培養(yǎng)19天后,細(xì)胞跨膜電阻值≥500 Ω·cm2,細(xì)胞形成一個(gè)完整的單層屏障,完整性通過(guò)Lucifer Yellow滲透性測(cè)試得到進(jìn)一步得到證實(shí),進(jìn)而單層細(xì)胞屏障可用于下一步的運(yùn)輸實(shí)驗(yàn)。SRL和SRL NCs的細(xì)胞毒性呈濃度依賴性(圖1B)。SRL和SRL-NCs的半數(shù)大抑菌濃度分別為147.51μg/mL和165.41μg/mL。在50μg/mL的SRL和SRL-NCs作用72h后,細(xì)胞存活率保持在80%以上。這表明本研究中使用的SRL濃度不會(huì)引起顯著的細(xì)胞毒性。因此,藥物對(duì)細(xì)胞活力的影響可以忽略不計(jì)。
轉(zhuǎn)運(yùn)實(shí)驗(yàn)采用完整緊密連接的腸上皮Caco-2細(xì)胞單層作為模型,SRL和SRL-NCs組的跨膜電阻(TEER)值(圖1D)在整個(gè)轉(zhuǎn)運(yùn)過(guò)程中未顯示出任何顯著變化,表明在沒(méi)有緊密連接遭到破壞的情況下,Caco-2細(xì)胞單層的完整性得以維持。
將含藥物HBSS緩沖液和空白HBSS緩沖液分別添加到模型頂層(AP)和基底外側(cè)(BL)側(cè),模擬藥物從GIT到血液的吸收和轉(zhuǎn)運(yùn)途徑。也就是說(shuō),細(xì)胞層從GIT中運(yùn)出藥物并將其輸送到血液/腸系膜淋巴。相反,當(dāng)將藥物HBSS緩沖液添加到BL側(cè)和空白HBSS緩沖液添加到AP側(cè)時(shí),模擬了動(dòng)物血液進(jìn)入腸腔的過(guò)程。計(jì)算出SRL-NCs的流出速率由于Papp、BL-AP/Papp、AP-BL與SRL顯著不同(圖1C)。原因可能是藥物被納米化后藥物變得更小,比表面積增加,因此跨單層的轉(zhuǎn)運(yùn)顯著增強(qiáng)。另一種可能是細(xì)胞占據(jù)了整個(gè)SRL-NCs結(jié)構(gòu),因此與SRL組相比,通透性增強(qiáng),SRL-NCs組AP→BL側(cè)Papp高5.6倍,外排率低。