恒溫?cái)U(kuò)增PCR Master Mix

  Allsheng恒溫?cái)U(kuò)增PCR Master Mix是一種即用型的恒溫?cái)U(kuò)增試劑盒，本試劑盒包含建立恒溫反應(yīng)體系（除引物和模板之外）的所有組分。與目前廣泛應(yīng)用的real-time qPCR技術(shù)相比，其需要四到六條模板特異性的引物以及具有鏈置換活性的Bst酶，在恒溫條件下1h內(nèi)完成擴(kuò)增；無需昂貴的熒光定量PCR儀；恒溫檢測方法具有特異性好，靈敏度高及檢測范圍廣泛等優(yōu)勢，可與real-time qPCR檢測技術(shù)相媲美。

交叉引物擴(kuò)增技術(shù)（CPA）介紹

恒溫?cái)U(kuò)增技術(shù)是繼PCR技術(shù)后發(fā)展起來的一門新型的核酸擴(kuò)增技術(shù)（Nucleic Acid Isothermal Amplification， NAIA），其擴(kuò)增反應(yīng)的全過程均在同一溫度下進(jìn)行。

與傳統(tǒng)PCR技術(shù)相比，使得他們對擴(kuò)增所需儀器的要求大大簡化，反應(yīng)時(shí)間大大縮短，因而具有巨大的應(yīng)用價(jià)值，成為分子診斷行業(yè)發(fā)展的熱點(diǎn)。

CPA擴(kuò)增主要包含以下幾個(gè)步驟：

1. 交叉正向引物CPF中的PFs與模板DNA中PFa互補(bǔ)，啟動(dòng)DNA合成，使得PRa被引入到所擴(kuò)增的產(chǎn)物中；

2. 外圍引物DP1s與PFa前端DP1a序列互補(bǔ)，通過鏈置換型DNA聚合酶向前延伸，一邊置換CPF合成的能與CPR和DP2a結(jié)合的單鏈產(chǎn)物（結(jié)構(gòu)3），一邊與模板DNA形成雙鏈產(chǎn)物（結(jié)構(gòu)2）；

3. 在結(jié)構(gòu)3中，DP2a通過鏈置換型DNA聚合酶向前延伸，置換出由CPR所延伸的單鏈產(chǎn)物（結(jié)構(gòu)5），同時(shí)合成與步驟2中由CPF延伸所產(chǎn)生單鏈DNA形成雙鏈產(chǎn)物（結(jié)構(gòu)4）,而結(jié)構(gòu)5相對起始的DNA模板，多了PRs和PFs兩個(gè)片段序列；

4. 單鏈結(jié)構(gòu)5中的3’端的PFa和PRs可分別與CPF中的PFs和CPR中的PRa互補(bǔ)結(jié)合， 可在鏈置換型DNA聚合酶的作用下延伸和置換出相應(yīng)的單鏈產(chǎn)物。延伸產(chǎn)物相對結(jié)構(gòu)5來說又增加了一個(gè)PFs區(qū)域（結(jié)構(gòu)8）；

5. 因此，擴(kuò)增引物CPF和CPR的不斷雜交和延伸，不僅使得結(jié)構(gòu)5的長度不斷的加長,從而引入更多CPF和CPR 3’端互補(bǔ)區(qū)域，同時(shí)也置換出了各種可與CPF和CPR 3’端互補(bǔ)的單鏈產(chǎn)物；

6. 通過CPF和CPR的不斷雜交延伸和DNA聚合酶的鏈置換作用，使得DNA拷貝數(shù)不斷的增加，從而達(dá)到基因擴(kuò)增的效果。

應(yīng)用

這種新型的核酸恒溫?cái)U(kuò)增方法，其廣泛應(yīng)用于細(xì)菌，病原微生物，寄生蟲以及病毒等的快速檢測。

特點(diǎn)

恒溫檢測方法由于其特異性好，靈敏度高，反應(yīng)設(shè)備及檢測設(shè)備價(jià)格低廉等廣受科研工作者的親睞，是未來檢測技術(shù)發(fā)展的趨勢。

性能對比

使用Allsheng® 恒溫 PCR Master Mix(紅色)、S公司（綠色）以及D公司（藍(lán)色）提供的恒溫PCR Master Mix對對蝦白斑病毒（WSSV）進(jìn)行實(shí)時(shí)定量PCR測定（左），模板使用0.1ng/μl對蝦白斑病毒基因組DNA。相同條件下，Allsheng®具有更好的擴(kuò)增能力且重復(fù)性良好。

使用說明

請?jiān)斠娬f明書