嘔吐毒素免疫親和柱

　　【概要】

　　脫氧雪腐鐮刀菌烯醇(deoxynivalenol， DON) 又稱嘔吐毒素(vomitoxin)，主要是由鐮刀菌的某些種產(chǎn)生的化學(xué)結(jié)構(gòu)和生物活性相似的有毒代謝產(chǎn)物——單端孢霉烯族化合物中的一種。廣泛存在于，主要污染小麥、大麥、玉米等谷類作物，也污染糧食制品，人和動(dòng)物在誤食被該毒素污染的糧谷類后可以產(chǎn)生廣泛的毒性效應(yīng)。DON明顯的毒性作用是引起嘔吐、腹瀉、腹痛等癥狀，并延緩生長(zhǎng)、降低免疫機(jī)能，與貧血、免疫抑制、食管癌、克山病也具有密切l(wèi)ian系。給人、家畜的健康造成巨大威脅。

　　【適用范圍及性能】

　　嘔吐毒素免疫親和柱用于定性、定量檢測(cè)谷物、酒類等食品和飼料等樣本中的脫氧雪腐鐮刀菌烯醇時(shí)的樣品前處理。

　　柱容量：≥1200ng

　　回收率：≥80%

　　【試驗(yàn)原理】

　　嘔吐毒素免疫親和柱的測(cè)定的基礎(chǔ)是抗原抗體反應(yīng)，脫氧雪腐鐮刀菌烯醇單克隆抗體連接在柱內(nèi)凝膠上，樣品中的脫氧雪腐鐮刀菌烯醇經(jīng)過(guò)提取、過(guò)濾、稀釋，然后將樣品提取液緩慢的通過(guò)脫氧雪腐鐮刀菌烯醇免疫親和層析柱，在免疫親和柱內(nèi)，脫氧雪腐鐮刀菌烯醇與抗體結(jié)合，之后洗滌免疫親和柱除去沒(méi)有被結(jié)合的其他物質(zhì)。用甲醇洗脫脫氧雪腐鐮刀菌烯醇，然后注入到分析儀器中用于檢測(cè)。

　　【包裝組成】

　　根據(jù)不同規(guī)格，每一個(gè)盒中包含5/25支脫氧雪腐鐮刀菌烯醇免疫親和層析柱及1份說(shuō)明書。

　　【需要而未提供的設(shè)備及試劑】

　　設(shè)備：

　　1. 高速均質(zhì)器或組織勻漿機(jī)

　　2. 粉碎機(jī)

　　3. 200mL/50mL量筒

　　4. 天平：感量0.1g

　　5. 微量移液器：?jiǎn)蔚?100μL～1000μL

　　6. 槽紋濾紙(折疊快速定性或定量濾紙)

　　7. 玻璃微纖維濾紙(1.5μm孔徑)

　　8. 50mL漏斗

　　9. 一次性玻璃試管

　　10. 泵流操作架(包括空氣泵，不同容積的玻璃注射器等)

　　試劑：

　　1. 蒸餾水或去離子水

　　2. 聚乙二醇(PEG)8000

　　3. 色譜級(jí)甲醇

　　4. pH7.0磷酸鹽緩沖溶液(PBS)：稱取8.0g氯hua鈉，1.2g磷酸氫二鈉，0.2g磷酸er氫鉀，0.2g氯hua鉀，用990mL純水溶解，然后用濃鹽酸調(diào)節(jié)pH值至7.0，后用純水稀釋至1000mL

　　【樣本處理步驟】

　　(一)花生，玉米，大米，小麥及其制品和飼料(稀釋倍數(shù)4)

　　1. 稱取25g粉碎的樣品，加入10g聚乙二醇8000后，用去離子水定容至200mL;

　　2. 轉(zhuǎn)移至均質(zhì)杯中，均質(zhì)器高速均質(zhì)2min;

　　3. 4000r/min離心5min或用定量濾紙過(guò)濾，取上清液，使用玻璃纖維濾紙過(guò)濾后待用;

　　4. 將免疫親和柱連接于10.0mL玻璃注射器下。準(zhǔn)確移取2mL上述樣品提取液注入玻璃注射器;

　　5. 將空氣壓力泵與玻璃注射器連接，調(diào)節(jié)壓力使溶液以約1滴/s流速緩慢通過(guò)免疫親和柱，直至2~3mL空氣通過(guò)柱體;

　　6. 以5.0mLPBS溶液和去離子水快速淋洗柱子1次，流速為2-3滴/s。棄去全部流出液，并使2mL~3mL空氣通過(guò)柱體;

　　7. 準(zhǔn)確加入1.0mL色譜級(jí)甲醇洗脫，流速為1 滴/s，收集全部洗脫液于玻璃試管中，供檢測(cè)用。

　　(二)酒類(稀釋倍數(shù)0.5)

　　1. 取脫氣酒類試樣(含二氧化碳的酒類樣品使用前先置于4℃冰箱冷藏30min，過(guò)濾或超聲脫氣)或其他不含二氧化碳的酒類試樣20g(精確到0.01g)，加入1g聚乙二醇(4.3)，用水定容至25.0mL，混勻;

　　2. 用玻璃纖維濾紙過(guò)濾至濾液澄清;

　　3. 將免疫親和柱連接于10.0mL玻璃注射器下。準(zhǔn)確移取2mL上述樣品提取液注入玻璃注射器;

　　4. 將空氣壓力泵與玻璃注射器連接，調(diào)節(jié)壓力使溶液以約1滴/s流速緩慢通過(guò)免疫親和柱，直至2~3mL空氣通過(guò)柱體;

　　5. 以5.0mLPBS溶液和去離子水快速淋洗柱子1次，流速為2-3滴/秒。棄去全部流出液，并使2mL~3mL空氣通過(guò)柱體;

　　6. 準(zhǔn)確加入1.0mL色譜級(jí)甲醇洗脫，流速為1 滴/s，收集全部洗脫液于玻璃試管中，供檢測(cè)用。

　　【結(jié)果判定】

　　經(jīng)嘔吐毒素免疫親和柱凈化后，收集到的甲醇洗脫液可直接使用熒光計(jì)或者HPLC檢測(cè)，也可使用薄層色譜或者酶聯(lián)免疫試劑盒進(jìn)行檢測(cè)。也可氮?dú)獯蹈珊螅瑥?fù)溶以提升濃度(稀釋倍數(shù)相應(yīng)變化)。

　　【注意事項(xiàng)】

　　1. 嘔吐毒素危害很大，應(yīng)戴手套操作。

　　2. 不要使用過(guò)了有效日期的免疫親和柱。

　　【貯藏條件及保存期】

　　貯藏條件：嘔吐毒素免疫親和柱可于常溫保存，2-8℃儲(chǔ)存可延長(zhǎng)有效期，不可凍存。

　　保存期：該產(chǎn)品有效期為12個(gè)月。