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純化小技巧 | MaXtar® COLL 400/700病毒應(yīng)用分享

來源:百林科醫(yī)藥科技(上海)有限公司   2024年05月30日 13:19  
 

 

百林科多模式層析填料家族中
 
有這么一類特殊的填料,憑借其獨(dú)特的填料結(jié)構(gòu)
 
發(fā)揮凝膠過濾吸附層析的雙重特性
 
專為超大分子設(shè)計(jì)。
 

 

 
  包括MaXtar® COLL 400、MaXtar® COLL 700兩種,分別適用于分子量超過400 KD和700 KD的超大分子。
 
  MaXtar® COLL 400/700產(chǎn)品簡介  
 
  獨(dú)特的雙層結(jié)構(gòu)設(shè)計(jì),外殼是多孔的鈍化層 ,確保 400 KD或700 KD 以上的大分子不會(huì)進(jìn)孔,直接走外水流穿;核心是偶聯(lián)了同時(shí)具有疏水和吸附負(fù)電荷作用基團(tuán)的球形內(nèi)核,最大程度結(jié)合宿主蛋白、 核酸等雜質(zhì)。具有明顯優(yōu)勢:
 
  • 以流穿模式處理400 KD 或700 KD 以上的大分子,工藝優(yōu)化更容易,更方便線性放大。
 
  • 改良的MaXtar® 基架具有更強(qiáng)剛性,因此在較低的反壓下能夠?qū)崿F(xiàn)更高工藝流速,提高工藝效率。
 
  • 相比于傳統(tǒng)的凝膠過濾層析,擁有更大的上樣量,更高流速,生產(chǎn)效率大大提升。
 
  • 耐受范圍廣,化學(xué)穩(wěn)定性好。
 
  • 適用于病毒及類病毒顆粒等生物大分子分離。
 
  如何選擇MaXtar® COLL 400/700  
 
  • MaXtar® COLL 400:如有病毒/大分子在MaXtar® COLL 700上收率不佳,有明顯吸附現(xiàn)象,可嘗試選擇更小孔徑的MaXtar® COLL 400進(jìn)行優(yōu)化。
 
  • MaXtar® COLL 700:主要適用分子量大于700KD(約30nm)的病毒/大分子。
 
  MaXtar® COLL 400/700應(yīng)用案例分享  
 
案例一:MaXtar® COLL 400在VLP的應(yīng)用
 

 

 
圖1:MaXtar® COLL 400純化VLP圖譜 
樣品:VLP(單體60kDa,120聚體) 
柱體積:30ml 
上樣量:300ml 
流速:7ml/min
 

表1:MaXtar® COLL 400純化結(jié)果

 
  小結(jié):結(jié)合層析圖譜和膠圖可見,純度有明顯提高,雜質(zhì)去除明顯。
 
案例二:MaXtar® COLL 700在慢病毒中的應(yīng)用
 
  建議測試的工藝條件
 
  樣品信息:濃縮后樣品
 
  平衡Buffer20 mM PB,150 mM NaCl ,pH 7.5或1×DPBS,pH 7.5
 
  CIP Buffer1 M NaOH,30%異丙醇

圖2:MaXtar® COLL 700純化慢病毒圖譜

 

表2:MaXtar® COLL 700純化結(jié)果

 
  小結(jié):回收率和雜質(zhì)去除水平,均符合預(yù)期。
 
  MaXtar® COLL 400/700應(yīng)用過程中的Tips  
 
  ◆ 為最大程度發(fā)揮COLL系列內(nèi)部的多種配基吸雜效果,建議在緩沖液中添加100~150mM NaCl;
 
  ◆ 由于雜質(zhì)與內(nèi)部配基之間的高效多模式結(jié)合,需要對(duì)填料進(jìn)行有效清潔,建議使用1M NaOH, 30%異丙醇。
 
  ◆ 不推薦使用檸檬酸鹽緩沖液,因?yàn)闄幟仕犭x子會(huì)與配基相互作用。

 

百林科多種層析填料
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