REAGEN^™ 卡那霉素酶聯(lián)免疫反應試劑盒

RND99033

1．概述

REAGEN^™ 卡那霉素酶聯(lián)免疫反應測試盒是用于腎臟、肝臟、肌肉（牛肉、雞肉和豬肉）、細胞裂解液、血、尿、牛奶中卡那霉素殘留的定量檢測。該試劑盒有以下特點：

• 快速(10-40分鐘)，多種樣品的非有機溶劑的提取方法，高回收率(>80%)。
• 高靈敏度（0.2ppb）。
• 高重復性。
• 快速的ELISA檢測方法（不考慮樣本量的前提下只需不到1小時）。

2.試劑盒原理

REAGEN^™ 卡那霉素酶聯(lián)免疫反應測試盒基于競爭性酶聯(lián)反應原理，抗原已經(jīng)包被于微孔板上。分析時，樣品、酶標物以及抗體加入孔中，如果樣品中含有藥物，會與微孔板上的抗原競爭抗體，同時酶標物與抗體結合。加入TMB底物，底物的顏色顯色強度與樣品中毒素的含量成反比。

3.試劑盒組成

已包被抗原的酶標板(Kanamycin-coated Plate)（可拆式） 1×96孔

標準液(Standards)（0，0.2，0.6，1.8，5.4，16.2ppb） 6×1.0mL

高標液1000ppb（Spiking） 1×1.0mL

一抗(Antibody #1) 1×6.0mL

HRP酶標二抗(HRP-Conjugated Ab#2) 1×6.0mL

10×樣品稀釋液（10×Sample diluent） 1×15mL

20×濃縮洗液(Wash Solution) 1×28mL

TMB底物(TMB Substrate) 1×12mL

終止液(Stop Buffer) 1×12mL

10×樣品提取液(10×Sample Ext. Buffer)（可選） 1×15mL

樣品平衡液（Sample Balance buffer） 1×2.0mL

本試劑盒應當在2-8℃的溫度下儲存，有效期為一年。如果超過1個月不使用試劑盒，請

將標品、一抗和二抗放置-20℃或者冰凍保存。

4.檢測限

5.交叉反應

6.未提供的設備或材料

• 酶標儀
• 組織勻漿器
• 漩渦振蕩器
• 移液器(10、20和100mL，1mL各一支)
• 多道移液器（50-300mL）

7.注意事項

實驗前請閱讀以下文字，以保證獲得佳實驗效果。

• 標準品中含有卡那霉素，請小心使用。
• 不要使用過期的試劑盒。
• 不同批次的試劑盒不要混用，抗體和微孔板具有盒與批次的特異性。
• 盡量保持室溫20-25℃，避免在通風口操作防止溫度過低，過熱或者蒸發(fā)。同樣的，不

要在陽光直射下實驗，防止過熱及蒸發(fā)。在孵育期間，如果工作臺溫度過低，應該鋪墊若干紙巾或者其他物料。

• 水質量很重要，確保使用蒸餾或者去離子水。
• 加入樣品或者試劑到空的微孔板時，吸嘴靠于微孔接近底部，并保持接觸。
• 孵育時間的計算越規(guī)范越好，保持添加標準品的一致性，先添加標準品后添加樣品。
• 從低濃度到高濃度地添加標準品，降低影響標準品曲線質量的風險。
• 將微孔板置于放有干燥劑的密封袋中，冷藏保存。

8.樣品的準備

確保樣品的正確保存，一般來說，樣品在2-4只能保存1-2天，如果要保存更長時間，就要保存在-20冷凍保存，在用之前需要將冷凍的樣品在室溫下或冰箱內解凍。

• 準備1×樣品稀釋液:

1體積 10×樣品稀釋液加9體積蒸餾水稀釋。

• 準備1×樣品提取液: 

1體積10×樣品提取液加9體積蒸餾水稀釋。

細胞裂解液

• 取100mL細胞裂解液，加900mL 1×樣品稀釋液，混勻；
• 離心5分鐘，4000×g；
• 每孔取50mL上清液來檢測。

稀釋倍數(shù):10

魚/蝦肉/肝/腎

• 稱取 1.0 g 勻漿樣品，加 4mL的1×樣品提取液；
• 渦流振蕩1分鐘；離心5分鐘，4000×g；
• 取200mL上清液到干凈的新管中，加入1.375mL 1×樣品稀釋液和25mL樣品平衡液，渦流混勻30秒。
• 每孔取50mL上清液來檢測。

稀釋倍數(shù)：40

血清/尿

• 取50mL樣品，加1.2mL 1×樣品稀釋液，混勻；
• 離心5分鐘，4000×g；
• 每孔取50mL上清液來檢測。

稀釋倍數(shù)：25

鮮奶

• 取100mL鮮奶到一干凈離心管，加900mL 1×樣品稀釋液；
• 漩渦震蕩30秒；
• 在4,000 x g離心10分鐘；
• 每孔取50mL上清液來檢測。

稀釋倍數(shù)：10

9.檢測步驟

注意：試劑在使用之前要在室溫下解凍1-2小時，確定在使用前閱讀過注意事項。準備適量的檢測用試劑，所有的試劑搖勻后使用。準備足夠所有小管所需的用量，不能將試劑倒回原來的瓶子中，處理試劑時建議用廢棄的瓶子以降低污染的風險。

• 1x洗液的制備

1體積的20x洗液同19體積的蒸餾水混合。

檢測

以下為計算份量的表格，用戶可根據(jù)自己的需要來確定需要配置多少試劑。

• 加入50mL的標準品于所設定的孔中；
• 加入50mL的樣品于所設定的孔中；
• 按順序在每孔中加入50mL HRP酶標二抗和50mL一抗，輕敲微孔板邊緣混勻30秒；
• 室溫（22.5±2.5）°C避光孵育30分鐘；
• 洗板4次，每次應該加入250mL 1×洗液，一次使板盡量甩干并在吸水紙上拍干；
• 加入100mL的TMB底物；計時，輕敲微孔板邊緣混勻30秒；
• 在室溫（22.5±2.5）°C避光孵育15分鐘，加入100mL的終止液終止反應；
• 在450nm下讀OD值 (讀數(shù)前，用無絨布擦拭除去微孔底部的水分和指痕)。

10.結果計算

• 分別計算標準、質控和樣品的平均吸光度值和相對吸光度值。

相對吸光度值 (%) = (標準或樣品吸光度值/零標準吸光度值) ´ 100

• 以相對吸光度值為縱坐標，標準濃度為橫坐標建立標準曲線。
• 從標準曲線上讀取質控和樣品的濃度值。

以下曲線圖是卡那霉素酶聯(lián)免疫反應測試盒典型標準曲線