詳細(xì)介紹
美Agena 核酸質(zhì)譜分析系統(tǒng) MassARRAY
---核酸質(zhì)譜高精度DNA定性定量分析平臺(tái)
技術(shù)特點(diǎn):
本系統(tǒng)的突出特點(diǎn)是以*的精確度和極快的速度,一次性掃描384個(gè)樣本中的多達(dá)40個(gè)SNP位點(diǎn)。首*行多重PCR擴(kuò)增,然后有經(jīng)過(guò)修飾的ddNTP作單堿基引物延伸,使質(zhì)譜能夠準(zhǔn)確識(shí)別堿基,并依據(jù)峰面積報(bào)告每個(gè)堿基的頻率。因此能夠準(zhǔn)確分析樣本中的等位基因分布頻率,適用于遺傳性疾病檢測(cè)和體細(xì)胞突變檢測(cè)以及鑒別一個(gè)體的正常或腫瘤組織。MassARRAY 反應(yīng)體系不需要雜交,可避免雜交錯(cuò)配干擾,也不需要熒光標(biāo)記。其采用的高密度SpectroCHIP 芯片能在8小時(shí)內(nèi)完成3840個(gè)樣本的多重SNP鑒定,全自動(dòng)分析結(jié)果,不受人為因素干擾。訪系統(tǒng)分為96孔和384孔2種不同通量和3種儀器型號(hào)供用戶靈活選擇,可滿足用戶低,中,高不同通量的使用需求。該系統(tǒng)的上市及時(shí)提供了從低到高不同規(guī)模的高效率和高質(zhì)量檢測(cè)SNP的技術(shù)平臺(tái),順應(yīng)了當(dāng)前醫(yī)學(xué)疾病基因組疾病機(jī)制研究和臨床診斷檢測(cè)迅猛發(fā)展的趨勢(shì)。
技術(shù)原理
核酸質(zhì)譜主要通過(guò)單堿基延伸和分子切割的兩種生物化學(xué)技術(shù)實(shí)現(xiàn)。
iPLEX SNP 基因型分析
Assay Designer 軟件對(duì)SNP的80-150bp區(qū)域設(shè)計(jì)多重PCR引物,并對(duì)SNP位點(diǎn)設(shè)計(jì)單堿基延伸引物。PCR擴(kuò)增處理:5ul體系做1-40重反應(yīng),45個(gè)循環(huán);產(chǎn)物經(jīng)蝦堿性磷酸酶(SAP)處理。單堿基延伸擴(kuò)增不同長(zhǎng)度的1-40條引物,用ddNTP作用堿基延伸,200個(gè)循環(huán)。DNA質(zhì)譜檢測(cè)和數(shù)據(jù)分析精確區(qū)分4種堿基的分子量,并自動(dòng)報(bào)告其生物結(jié)果。
EpiTYPER DNA 甲基化分析
亞硫酸鹽將未甲基化的胞嘧啶轉(zhuǎn)變?yōu)槟蜞奏?,PCR擴(kuò)增和SAP處理用反鏈5端帶T7啟動(dòng)的引物擴(kuò)增500bp, 產(chǎn)物經(jīng)蝦堿性磷酸酶(SAP)處理,體外轉(zhuǎn)錄將DNA轉(zhuǎn)錄為PRA, 堿基特異性酶切酶切T后, DNA 片段的分子量取決于亞硫酸鹽處理后的堿基變化。