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納米抗體技術發(fā)現(xiàn)服務平臺

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更新時間：2023-10-17 17:21:35瀏覽次數(shù)：219次

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泰克生物科技（天津）有限公司

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產(chǎn)品簡介

產(chǎn)地	國產(chǎn)	級別	化工級

泰克生物著力于為客戶提供高質(zhì)量，且具性價比的抗體藥物前期發(fā)現(xiàn)技術服務。我們在藥物抗體發(fā)現(xiàn)方面擁有10年的項目開發(fā)經(jīng)驗和心得，積累了充足的抗體定制和重組蛋白生產(chǎn)經(jīng)驗。

詳細介紹

泰克生物著力于為客戶提供高質(zhì)量，且具性價比的抗體藥物前期發(fā)現(xiàn)技術服務。我們在藥物抗體發(fā)現(xiàn)方面擁有10年的項目開發(fā)經(jīng)驗和心得，積累了充足的抗體定制和重組蛋白生產(chǎn)經(jīng)驗。基于噬菌體展示技術（Phage Display Technology）平臺的服務，泰克生物能夠為客戶提供一系列包括但不限于兔源、鼠源、羊源、駝源及牛源等不同物種的單克隆抗體制備服務，及其配套的完整可追溯性文件體系。

噬菌體展示技術（即：納米抗體技術）是將外源蛋白或多肽的DNA序列插入到噬菌體外殼蛋白結(jié)構(gòu)基因的適當位置，通常為M13噬菌體的P3蛋白，使外源基因隨外殼蛋白的表達而展示到噬菌體表面的生物技術。噬菌體展示的優(yōu)勢在于其展示納米抗體文庫中變異抗體基因的多樣性，各個重組噬菌體（常用噬菌體為M13噬菌體）表面展示出不同的抗原結(jié)合域，相較于傳統(tǒng)雜交瘤方法，噬菌體展示技術在抗體基因展示與篩選層面則具有非常突出的效率優(yōu)勢（如雜交瘤融合效率一般<0.4%，即1000次融合細胞中，大概4個融合子；而噬菌體展示輕松可以獲得10⁸-10⁹個正確抗體序列）。

█ 噬菌體展示抗體文庫構(gòu)建服務

泰克生物可為客戶提供駝源VHH納米抗體庫，scFv抗體庫，F(xiàn)ab抗體文庫構(gòu)建以及篩選服務。其中VHH納米抗體庫，又稱為駝源重鏈抗體文庫，抗體分子量大小為15kDa，是駝源動物產(chǎn)生的一種抗體。目前被廣泛應用于CarT/Car-NK治療性的駝源VHH抗體（又被稱為納米抗體）噬菌體展示發(fā)現(xiàn)路徑如圖1所示：

圖1基于噬菌體技術平臺的駝源VHH抗體發(fā)現(xiàn)服務

泰克生物還可以提供一系列的抗體驗證服務，例如：通過GST pull-down或CO-IP策略檢測展示的蛋白質(zhì)與其他分子之間的相互作用或分離特定目標、抗原抗體BLI親和力測定、細胞功能驗證及細胞系體外驗證等。

泰克生物提供的納米抗體庫具有豐富的多樣性和規(guī)模，是篩選所有抗原類型以及選擇具有高親和力的功能性抗體的理想選擇。憑借多年的經(jīng)驗，我們開發(fā)了多種噬菌體平臺，可以為您定制特定的納米抗體文庫。如果您有興趣開展噬菌體展示抗體項目，或者其他相關服務，例如抗體測序、scFv、Fab和Fc 融合蛋白等，請聯(lián)系我們！

█ 服務內(nèi)容和周期

步驟	服務內(nèi)容	QC標準	周期
Step1:蛋白表達	(1) 密碼子優(yōu)化+基因模板合成+表達載體構(gòu)建； (2) 質(zhì)粒抽提+轉(zhuǎn)染（哺乳表達系統(tǒng)）目的蛋白檢測（WB，SDS-PAGE）； (3) 蛋白表達放大+蛋白親和純化；	交付：表達載體，克隆甘油菌，重組蛋白3-3.5mg，純度>85%，標準實驗報告	4-6周
Step2:動物免疫	(1) 動物免疫4次，加強免疫一針，共計免疫5針； (2) 免疫前采集陰性血清，第4針采血進行ELISA檢測血清效價； (3) 若第4針血清抗體效價（蛋白抗原>10⁵；多肽抗原>10⁴）滿足要求，則采血前7天再次加強免疫1針，如不滿足要求，則繼續(xù)常規(guī)免疫； (4) 效價合格，采血分離單核細胞；	動物：背景清晰（年齡，性別，防疫情況）；免疫：蛋白抗原>10⁵；多肽抗原>10⁴；采血：數(shù)量100ml以上； PBMC細胞：>10⁵/vial	8-10周
Step3:模板cDNA制備	(1) PBMC總RNA提取（RNA提取試劑盒） (2) 高保真RT-PCR制備cDNA（反轉(zhuǎn)錄試劑盒）	cDNA：反轉(zhuǎn)后>1ug/ul，膠圖分布均勻； cDNA模板總量>150ug；	1 天
Step4:噬菌體展示文庫構(gòu)建	(1) 以cDNA為模板，兩輪PCR法擴增VHH基因； (2) 噬粒構(gòu)建與轉(zhuǎn)化： VHH基因拼接噬菌粒載體，電擊轉(zhuǎn)化TG1宿主菌，構(gòu)建抗體庫，混合建庫電擊次數(shù)不低于30次（單靶點建庫，電擊次數(shù)不低于15次）； (3) 鑒定：隨機挑選24個克隆，PCR鑒定陽性率+插入率 (4) 輔助噬菌體準備：M13噬菌體擴增+純化； (5) VHH展示文庫救援	文庫陽性率：>90%；文庫插入性率：>90%；庫容：>10⁸	1-2周
Step5:文庫篩選（3輪篩選）(固相篩選)	(1) 抗原包被（單個蛋白篩選，常規(guī)默認是固相篩選法或磁珠分選；細胞篩選方法需要單獨核算費用）； (2) 默認3輪篩選：壓力篩選，較大限度去除非特異性抗體； (3) 挑取96個克隆擴增噬菌體+IPTG誘導表達+ELISA檢測陽性克隆； (4) 挑取全部陽性克隆進行基因測序（>20個，多達96個）；	ELISA陽性標準：P/N>3； VHH篩選標準：CDR氨基酸序列不同	2-3周
Step6:抗體驗證（體外驗證）	(1) 將獲得的抗體序列構(gòu)建合適的表達載體進行表達+親和純化+抗體蛋白定量； (2) Elisa驗證抗體與抗原結(jié)合，進行下游驗證（交付EC50數(shù)據(jù)）; (3) BLI法驗證抗體親和力； (4) 細胞功能驗證：流式驗證； (5) 驗證細胞系（抗原受體過表達細胞系）；	交付：表達載體，克隆菌株，表達菌株，重組抗體蛋白1mg，純度90%；快速親和力測定結(jié)果；	4-6周