【產(chǎn)品名稱(chēng)】
通用名稱(chēng)：人降鈣素原（PCT）酶聯(lián)免疫分析試劑盒
英文名稱(chēng)：PCT Quantitative Enzyme-linked Immunosorbent Assay Kit
【包裝規(guī)格】 96人份/盒
【預(yù)期用途】
本試劑盒采用ELISA雙抗體酶聯(lián)免疫夾心法定量檢測(cè)人血清、血漿及相關(guān)液體樣本中降鈣素原（PCT）含量。適用于嚴(yán)重感染或膿毒血癥的早期診斷；全身性感染與非細(xì)菌性炎癥反應(yīng)（如自身免疫性疾?。┑蔫b別診斷；全身性細(xì)菌性感染與病毒感染的鑒別診斷；全身性細(xì)菌/真菌感染與器官移植排斥和移植后病毒感染的鑒別診斷；作為高危患者（如ICU、器官移植術(shù)后或接受免疫抑制治療的患者）感染性疾病的監(jiān)測(cè)指標(biāo)。
【臨床意義】
人降鈣素原（PCT）是人降鈣素的前體物，無(wú)激素活性，其在健康人血清中水平極低，但在全身性細(xì)菌感染患者血清中含量迅速升高，感染后兩個(gè)小時(shí)即可檢測(cè)到，且持續(xù)時(shí)間長(zhǎng)，其在血清中的水平與感染性疾病的嚴(yán)重程度呈正相關(guān),經(jīng)有效抗生素治療后，PCT水平可迅速下降，而病毒感染、腫瘤、自身免疫性疾病、外傷（多創(chuàng)傷或手術(shù)創(chuàng)傷）、臨床用藥、慢性炎癥以及局部感染者，PCT水平維持在正常范圍內(nèi)或者有輕度升高。因此，PCT是細(xì)菌感染所致重癥全身性炎癥反應(yīng)的良好指標(biāo)，在全身性細(xì)菌感染和膿毒癥輔助鑒別診斷、預(yù)后判斷、療效觀察等方面有很高的臨床價(jià)值。
人降鈣素原（PCT）是人降鈣素的前體物，無(wú)激素活性，其在健康人血清中水平極低，但在全身性細(xì)菌感染患者血清中含量迅速升高，感染后兩個(gè)小時(shí)即可檢測(cè)到，且持續(xù)時(shí)間長(zhǎng)，其在血清中的水平與感染性疾病的嚴(yán)重程度呈正相關(guān),經(jīng)有效抗生素治療后，PCT水平可迅速下降，而病毒感染、腫瘤、自身免疫性疾病、外傷（多創(chuàng)傷或手術(shù)創(chuàng)傷）、臨床用藥、慢性炎癥以及局部感染者，PCT水平維持在正常范圍內(nèi)或者有輕度升高。因此，PCT是細(xì)菌感染所致重癥全身性炎癥反應(yīng)的良好指標(biāo)，在全身性細(xì)菌感染和膿毒癥輔助鑒別診斷、預(yù)后判斷、療效觀察等方面有很高的臨床價(jià)值。
在局限性感染、病毒感染、自身免疫性疾病、手術(shù)創(chuàng)傷和慢性炎癥時(shí)，其血漿濃度正?；蜉p度升高；嚴(yán)重細(xì)菌感染或霉菌、寄生蟲(chóng)感染（如腹膜炎、軟組織感染、蜂窩組織炎、吻合口漏、肺炎、ARDS）時(shí)大量上升，特別是膿毒性休克時(shí)PCT時(shí)濃度成倍升高。因此，利用它能有效地評(píng)估感染和炎癥的嚴(yán)重程度及進(jìn)展情況，還能監(jiān)測(cè)藥物療效，指導(dǎo)外科圍手術(shù)期的處理以及抗生素正確應(yīng)用。
作為高危患者（如ICU、器官移植術(shù)后或接受免疫抑制治療的患者）感染性疾病的監(jiān)測(cè)指標(biāo)；早期預(yù)測(cè)膿毒性休克、多器官功能不全綜合征（MODS）、成人呼吸窘迫綜合征（ARDS）及多器官功能障礙（MOF）的發(fā)生及判斷疾病預(yù)后等。
【檢測(cè)原理】
本試劑盒采用雙抗體夾心法測(cè)定標(biāo)本中人降鈣素原（PCT）水平。用純化的人降鈣素原（PCT）抗體包被反應(yīng)板，加入待測(cè)標(biāo)本孵育后，再加入辣根過(guò)氧化物酶（HRP）標(biāo)記的PCT抗體。如果標(biāo)本中含有PCT，則能與包被在反應(yīng)板上的PCT抗體結(jié)合，并與HRP標(biāo)記的PCT抗體形成復(fù)合物，經(jīng)洗滌后加入TMB底物，TMB在HRP酶的催化下產(chǎn)生藍(lán)色，并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成黃色。酶標(biāo)儀在450nm波長(zhǎng)下測(cè)定的吸光度（OD值）與標(biāo)本中PCT含量呈線(xiàn)性關(guān)系。通過(guò)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)可以計(jì)算出標(biāo)本中PCT的含量。
【主要組成成份】
| 序號(hào) | 項(xiàng)目 | 容量 | 數(shù)量 |
| 1 | 濃縮洗滌液（30×） | 20 mL | 1瓶 |
| 2 | 酶標(biāo)試劑 | 6mL | 1瓶 |
| 3 | 酶標(biāo)包被板 | 12孔×8條 | 1塊 |
| 4 | 樣品稀釋液 | 6mL | 1瓶 |
| 5 | 顯色劑A液 | 6mL | 1瓶 |
| 6 | 顯色劑B液 | 6mL | 1瓶 |
| 7 | 終止液 | 6mL | 1瓶 |
| 8 | 標(biāo)準(zhǔn)品（2400 ng/L） | 0.5 mL | 1瓶 |
| 9 | 標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液 | 1.5 mL | 1瓶 |
注：使用時(shí)，先將瓶中內(nèi)容物搖勻，不同批號(hào)試劑盒組份請(qǐng)勿混用
【儲(chǔ)存條件及有效期】
1、 儲(chǔ)存條件：2～8℃避光保存。
2、 有效期：2～8℃避光保存，自半成品檢定合格之日起，有效期6個(gè)月。
【適用儀器】
酶聯(lián)檢測(cè)系統(tǒng)：
| ① | 洗板機(jī)（非必須） | 一臺(tái) |
| ② | 酶標(biāo)儀 | 一臺(tái) |
| ③ | 恒溫箱 | 一臺(tái) |
【樣本要求】
1、 本試劑盒適用于定量檢測(cè)人血清、血漿及相關(guān)液體樣本中降鈣素原（PCT）含量。
2、 血清：全血標(biāo)本請(qǐng)于室溫放置2小時(shí)或4℃過(guò)夜后于1000 g離心20分鐘，取上清即可檢測(cè)，或?qū)⑸锨逯糜?20℃或-80℃保存，但應(yīng)避免反復(fù)凍融。
3、 血漿：用EDTA或肝素作為抗凝劑，標(biāo)本采集后30分鐘內(nèi)于1000 g離心15分鐘，取上清即可檢測(cè)，或?qū)⑸锨逯糜?20℃或-80℃保存，但應(yīng)避免反復(fù)凍融。
4、 其它生物標(biāo)本：1000 g離心20分鐘，取上清即可檢測(cè)，或?qū)⑸锨逯糜?20℃或-80℃保存，但應(yīng)避免反復(fù)凍融。
5、 樣本使用前應(yīng)置于室溫（18～30℃）平衡30分鐘。
6、 樣本稀釋時(shí)應(yīng)充分混勻，盡量避免起泡，可上下顛倒混和，不要在混勻器上強(qiáng)烈振蕩。
7、 樣本采集和處理時(shí)應(yīng)戴口罩和手套，避免汗液、唾液及其氣溶膠污染樣本。
8、 樣本檢測(cè)前如需運(yùn)輸，建議運(yùn)輸時(shí)保持2-8℃（冰盒）或-20℃（干冰），不要超過(guò)上述保存期限。
9、 不能檢測(cè)含NaN3的樣品，因NaN3抑制辣根過(guò)氧化物酶的（HRP）活性
【檢驗(yàn)方法】
1、試劑、樣本準(zhǔn)備
⑴ 試劑準(zhǔn)備
① 將試劑盒置室溫（18～26℃）平衡15～30分鐘。
② 從試劑盒中取出濃縮洗滌液，用新鮮的純化水1：1稀釋后加入洗板機(jī)的洗液瓶中。
⑵ 樣本準(zhǔn)備
標(biāo)準(zhǔn)品的稀釋?zhuān)河脴?biāo)準(zhǔn)品稀釋液按照下圖表將標(biāo)準(zhǔn)品稀釋?zhuān)苽?-5號(hào)標(biāo)準(zhǔn)樣品。為保證結(jié)果的準(zhǔn)確性，每次實(shí)驗(yàn)請(qǐng)配置新的標(biāo)準(zhǔn)品溶液。
| 1200 ng/L | 5號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品 | 150 μL的原倍標(biāo)準(zhǔn)品加入150 μL標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液 |
| 600 ng/L | 4號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品 | 150 μL的5號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品加入150 μL標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液 |
| 300 ng/L | 3號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品 | 150 μL的4號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品加入150 μL標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液 |
| 150 ng/L | 2號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品 | 150 μL的3號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品加入150 μL標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液 |
| 75 ng/L | 1號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品 | 150 μL的2號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品加入150 μL標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液 |
2、試驗(yàn)條件
在室溫（18～26℃）嚴(yán)格按照試劑盒說(shuō)明書(shū)進(jìn)行操作。
3、操作步驟
（1） 取出所需的PCT抗體包被板反應(yīng)條置于微孔架上（立即將剩余的微孔反應(yīng)條放回鋁箔袋中，并重新密封鋁箔袋）。
（2） 分別設(shè)空白孔（空白對(duì)照孔不加樣品及酶標(biāo)試劑，其余各步操作相同）、標(biāo)準(zhǔn)孔、待測(cè)樣品孔。在酶標(biāo)包被板上標(biāo)準(zhǔn)品準(zhǔn)確加樣50 μL，待測(cè)樣品孔中先加樣品稀釋液40 μL，然后再加待測(cè)樣品10 μL（樣品zui終稀釋度為5倍）。加樣將樣品加于酶標(biāo)板孔底部，盡量不觸及孔壁，輕輕晃動(dòng)混勻，置37℃恒溫箱孵育30分鐘。
（3） 小心揭掉封板膜，棄去孔內(nèi)液體，洗滌液注滿(mǎn)各孔、靜置30秒，甩干，重復(fù)5次，拍干?；蛘呃孟窗鍣C(jī)洗滌：程序4個(gè)循環(huán)，每孔350 μL，洗滌后拍干。
（4） 加入酶結(jié)合物，每孔加入酶標(biāo)試劑50 μL，空白孔除外，充分混勻，置37℃恒溫箱孵育30分鐘。
（5） 重復(fù)操作程序③
（6） 加入顯色劑A50 μL，再加入顯色劑B50 μL，輕輕震蕩混勻，37℃避光顯色15分鐘.
（7） 每孔加終止液每孔50 μL，充分混勻，終止反應(yīng)。
（8） 以空白孔調(diào)0，用酶標(biāo)儀依序測(cè)量各孔在450 nm波長(zhǎng)的吸光度（OD值）。 測(cè)定應(yīng)在加終止液后15分鐘以?xún)?nèi)進(jìn)行。
4、試驗(yàn)結(jié)果的計(jì)算
可以采用作圖法或計(jì)算法進(jìn)行結(jié)果計(jì)算，推薦采用計(jì)算法。
作圖法：以標(biāo)準(zhǔn)品抗原含量為橫坐標(biāo)（x），以其對(duì)應(yīng)的吸光值（OD值）為縱坐標(biāo)（y）繪出標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)，然后根據(jù)檢測(cè)樣本測(cè)得的吸光度（OD值）在標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)上查出相應(yīng)的樣本抗原含量，再乘以樣本稀釋倍數(shù)，即為樣本的實(shí)際濃度。
計(jì)算法：以標(biāo)準(zhǔn)品抗原含量為自變量（x），以其對(duì)應(yīng)的吸光值（OD值）為應(yīng)變量（y），求出回歸方程，將待測(cè)樣本的吸光值代入回歸方程，求得對(duì)應(yīng)的標(biāo)本抗原含量，再乘以樣本稀釋倍數(shù)，即為樣本的實(shí)際濃度。
【檢測(cè)范圍】
75ng/L -1200ng/L
【參考值（參考范圍）】
健康人：<500 ng/L
【檢驗(yàn)結(jié)果的解釋】
對(duì)PCT陽(yáng)性檢出者，應(yīng)結(jié)合病史、臨床癥狀及體征等綜合判斷。以PCT含量<500 ng/L的為陰性，對(duì)PCT含量在100~500 ng/L之間者，建議動(dòng)態(tài)觀察。對(duì)PCT含量大于1200 ng/L的樣本，應(yīng)準(zhǔn)確稀釋后重做，zui后將測(cè)得的PCT含量乘稀釋倍數(shù)即為該樣本實(shí)際PCT含量。
【檢驗(yàn)方法的局限性】
PCT的水平作為診斷、監(jiān)測(cè)重癥感染患者的常規(guī)指標(biāo)，不能作為是否存在細(xì)菌和病毒感染的*依據(jù)。對(duì)PCT檢測(cè)結(jié)果的解釋需結(jié)合其他臨床檢查結(jié)果和根據(jù)臨床疾病診斷的程序。
需要注意的是：
（1） 在病毒感染或非感染性炎癥反應(yīng)時(shí)，血PCT水平不升高或僅有輕度升高。
（2） PCT水平測(cè)定不能特異性反映病原體類(lèi)型及其對(duì)抗生素的敏感性和耐藥性；必須同時(shí)結(jié)合病原學(xué)檢查和藥物敏感試驗(yàn)結(jié)果以提高治療的針對(duì)性。
（3） 接受OKT3免疫抑制治療的移植患者PCT水平常有提高，這可能是細(xì)胞因子釋放綜合征的繼發(fā)表現(xiàn)，應(yīng)用OKT3后PCT水平的升高并不一定提示感染的存在，須結(jié)合其他指標(biāo)綜合分析。
（4） 膿毒血癥患者不論是否接受免疫抑制治療，其在發(fā)生膿毒癥的zui初3天內(nèi)PCT水平并無(wú)差異，隨后免疫缺陷患者在第3～5天時(shí)PCT 值有所減低，而免疫力正常的患者至第5天后PCT水平才開(kāi)始下降,對(duì)于膿毒血癥患者建議采取動(dòng)態(tài)觀察。
【產(chǎn)品性能指標(biāo)】
1. 特異性：
20份正常人血清PCT 檢測(cè)結(jié)果不得出現(xiàn)一份大于500 ng/L。
2. zui低檢出量：zui低檢出量為40 ng/L。
3. 線(xiàn)性范圍：75ng/L～1200ng/L，相關(guān)系數(shù)r應(yīng)不低于0.98。
4. 穩(wěn)定性：37℃放置3天，檢定結(jié)果應(yīng)達(dá)到標(biāo)準(zhǔn)。
【注意事項(xiàng)】
1． 試劑盒使用前應(yīng)置于室溫平衡15-30分鐘后方可使用，酶標(biāo)包被板開(kāi)封后如未用完，板條應(yīng)裝入密封袋中保存。
2． 使用時(shí)，先將瓶中內(nèi)容物搖勻，不同批號(hào)試劑盒組份請(qǐng)勿混用。
3． 濃洗滌液可能會(huì)有結(jié)晶析出，稀釋時(shí)可在水浴中加溫助溶，洗滌時(shí)不影響結(jié)果。
4． 嚴(yán)格控制反應(yīng)時(shí)間和顯色時(shí)間，一次加樣時(shí)間控制在5分鐘內(nèi)。
5． 本試劑盒為一次性用品，使用后的試劑盒和樣本等廢棄物應(yīng)作為傳染源按照國(guó)家相關(guān)規(guī)定處理。
6． 底物請(qǐng)避光保存。
7． 封板膜只限一次性使用，以避免交叉污染。
8． 嚴(yán)格按照說(shuō)明書(shū)的操作進(jìn)行，試驗(yàn)結(jié)果判定必須以酶標(biāo)儀讀數(shù)為準(zhǔn)，無(wú)效結(jié)果必須重測(cè)。
9． 本試劑盒采用硫酸作為終止液，其具有輕微的腐蝕性，使用時(shí)應(yīng)避免接觸衣物或眼、手等皮膚暴露部位。
【生產(chǎn)企業(yè)】 廣州健侖生物科技有限公司
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【電子郵件】 Service@jianlun.com
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【公司】
【營(yíng)銷(xiāo)中心】 廣州市中山大道中358號(hào)東溪商務(wù)大廈B座511室
【公司地址】 廣州市天河區(qū)車(chē)陂第十五工業(yè)園一幢4067室
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