脊髓灰質(zhì)炎病毒通用型PCR檢測試劑盒說明書

使用方法:
一、樣品 DNA 的制備
用自選方法提取 Cps DNA。注意：DNA 純化方法是決定檢測靈敏度的關鍵因素。如果不能很好純化樣品 DNA，后面的 PCR 再靈敏也不能提高整體檢測靈敏度。
二、制備 Cps 標準曲線（以 10-10E6 這 6 個 10 倍稀釋度為例。由于標準品濃度非常高，因此下列稀釋操作一定要在獨立的區(qū)域進行，千萬不能污染樣品或本試劑盒的其他成分）。為增加產(chǎn)品穩(wěn)定性和避免擴散傳染性病原，本產(chǎn)品不提供活體病毒做陽性對照，只提供沒有傳染性的、可以直接使用的 DN**段作為陽性對照。
1. 標記 6 個離心管，分別為 6，5，4，3，2 和 1 號。
2. 用帶芯槍頭分別加入 45 μL 超純水（用帶芯槍頭，下同）。
3. 先將本試劑盒提供的陽性對照用 TE 緩沖液或超純水 10 倍梯度稀釋到10E7 拷貝/μL（注：請不要將本試劑盒提供的標準品一次性稀釋至 10E7拷貝/μL，建議每次稀釋 10 倍，梯度稀釋至 10E7 拷貝/μL）。
4. 在 6 號管中加入 5 μL 10E7 拷貝/μL 的 Cps 陽性對照(上步稀釋所得)，充分震蕩 1 分鐘，得 10E6 拷貝/μL 的陽性對照。
5. 換槍頭，從 6 號管中取 5 μL 溶液到 5 號管中，充分震蕩 1 分鐘，得 10E5拷貝/μL 的陽性對照。
6. 換槍頭，從 5 號管中取 5 μL 溶液到 4 號管中，重復上面的操作直到得到 6個稀釋度的陽性對照。
7. NC 管中不加任何陽性對照。
8. 從 1-6 號管中分別取 5 μL 和待測樣品一起進行定量 PCR（見下步），每個樣品做 3 次重復。PCR 后得到每個陽性對照稀釋樣品的熒光 PCR Ct 值，并以之為縱軸，以濃度的對數(shù)值為橫軸，繪制標準曲線。

運輸及保存：低溫運輸，-20℃保存，有效期一年。使用本試劑盒提供的陽性對照時，由于其濃度較高，一定要注意不要污染其他試劑和成分。在專門的區(qū)域操作。

其中引物與模板的正確結(jié)合是關鍵。引物與模板的結(jié)合及引物鏈的延伸是遵循堿基配對原則的。聚合酶合成反應的忠實性及Taq DNA聚合酶耐高溫性，使反應中模板與引物的結(jié)合(復性)可以在較高的溫度下進行，結(jié)合的特異性大大增加，被擴增的靶基因片段也就能保持很高的正確度。再通過選擇特異性和保守性高的靶基因區(qū)，其特異性程度就更高。

(2) 靈敏度高
PCR產(chǎn)物的生成量是以指數(shù)方式增加的，能將皮克(pg=10-12g)量級的起始待測模板擴增到微克(ug=10-6g)水平。能從100萬個細胞中檢出一個靶細胞；在病毒的檢測中，PCR的靈敏度可達3個RFU(空斑形成單位)；在細菌學中zui小檢出率為3個細菌。
(3) 簡便、快速
PCR反應用耐高溫的Taq DNA聚合酶，一次性地將反應液加好后，即在DNA擴增液和水浴鍋上進行變性-退火-延伸反應，一般在2～4 小時完成擴增反應。擴增產(chǎn)物一般用電泳分析，不一定要用同位素，無放射性污染、易推廣。
(4) 對標本的純度要求低
不需要分離病毒或細菌及培養(yǎng)細胞，DNA 粗制品及總RNA均可作為擴增模板?？芍苯佑门R床標本如血液、體腔液、洗嗽液、毛發(fā)、細胞、活PCR技術(shù)概論。
注意事項：
①加入試劑的順序應一致，以保證所有反應板孔溫育的時間一樣。
②使用干凈的塑料容器配置洗滌液。
③按照雞血紅蛋白(HB)ELISA檢測試劑盒說明書中標明的時間、加液的量及順序進行溫育操作。
④底物A應揮發(fā)，避免長時間打開蓋子。底物B對光敏感，避免長時間暴露于光下。避免用手接觸，有毒。實驗完成后應立即讀取OD值。
⑤洗滌酶標板時應充分拍干，不要將吸水紙直接放入酶標反應孔中吸水。
⑥使用一次性的吸頭以免交叉污染，吸取終止液和底物A、B液時，避免使用帶金屬部分的加樣器。
⑦實驗中不用的板條應立即放回包裝袋中，密封保存，以免變質(zhì)。
⑧試劑應按標簽說明書儲存，使用前恢復到室溫。稀稀過后的標準品應丟棄，不可保存。
⑨不用的其它試劑應包裝好或蓋好。不同批號的試劑不要混用。保質(zhì)前使用。

以下是脊髓灰質(zhì)炎病毒通用型PCR檢測試劑盒說明書的相關產(chǎn)品：

水楊苷發(fā)酵管BR20支國產(chǎn)/進口

NCI-H358(人非小細胞肺細胞)5×106cells/瓶×2

U14(小鼠子宮頸細胞)5×106cells/瓶×2

水螺菌 Aquaspirillum sp.戊糖桿菌 Lactobacillus pentosus

小鼠氣管平滑肌細胞*培養(yǎng)基豇豆慢生根瘤菌 Bradyrhizobium vigna

P815(小鼠肥大細胞瘤細胞)5×106cells/瓶×2

NCI-H2452(人間皮瘤細胞)5×106cells/瓶×2

SKOV3/Taxol-25, 人卵巢紫杉醇耐藥細胞株

大鼠尿道上皮細胞*培養(yǎng)基日本根霉

葡枝根霉 Rhizopus stolonifer

酸球菌霍氏亞種 Lactococcus lactis subsp. hordniae大豆慢生根瘤菌 Bradyrhizobium japonicum

脊髓灰質(zhì)炎病毒通用型PCR檢測試劑盒說明書石蒜裂堿 CAS 477-19-0 規(guī)格： HPLC≥98%;20mg 訂購|咨詢

沒食子兒茶素; 棓兒茶酸; 沒食子酰兒茶 CAS 3371-27-5 規(guī)格： HPLC≥98%,20mg/支 訂購|咨詢

丁香樹脂醇雙葡萄糖苷 CAS 66791-77-3 規(guī)格： HPLC≥98%;20mg 訂購|咨詢

日蟾它靈 CAS  規(guī)格： 10mg 訂購|咨詢

羥喜樹堿 CAS  規(guī)格： 50mg 訂購|咨詢

β，β’-二甲基酰阿卡寧 CAS 34539-65-6 規(guī)格： 20mg 訂購|咨詢

羥基積雪草苷 CAS 18449-41-7 規(guī)格： 20mg 訂購|咨詢

異鼠李素--3-O-β-D-葡萄糖苷 CAS 5041-82-7 規(guī)格： 20mg 訂購|咨詢

大酚溶液(1mg/ml) CAS  規(guī)格： 0.3ml 訂購|咨詢

石杉堿乙（95%） CAS 103548-82-9 規(guī)格： 20mg 訂購|咨詢

β－欖香烯 CAS  規(guī)格： 0.1ml 訂購|咨詢