純綠青霉PCR檢測試劑盒說明書

使用方法:
一、樣品 DNA 的制備
用自選方法提取 Cps DNA。注意：DNA 純化方法是決定檢測靈敏度的關(guān)鍵因素。如果不能很好純化樣品 DNA，后面的 PCR 再靈敏也不能提高整體檢測靈敏度。
二、制備 Cps 標(biāo)準(zhǔn)曲線（以 10-10E6 這 6 個 10 倍稀釋度為例。由于標(biāo)準(zhǔn)品濃度非常高，因此下列稀釋操作一定要在獨(dú)立的區(qū)域進(jìn)行，千萬不能污染樣品或本試劑盒的其他成分）。為增加產(chǎn)品穩(wěn)定性和避免擴(kuò)散傳染性病原，本產(chǎn)品不提供活體病毒做陽性對照，只提供沒有傳染性的、可以直接使用的 DN**段作為陽性對照。
1. 標(biāo)記 6 個離心管，分別為 6，5，4，3，2 和 1 號。
2. 用帶芯槍頭分別加入 45 μL 超純水（用帶芯槍頭，下同）。
3. 先將本試劑盒提供的陽性對照用 TE 緩沖液或超純水 10 倍梯度稀釋到10E7 拷貝/μL（注：請不要將本試劑盒提供的標(biāo)準(zhǔn)品一次性稀釋至 10E7拷貝/μL，建議每次稀釋 10 倍，梯度稀釋至 10E7 拷貝/μL）。
4. 在 6 號管中加入 5 μL 10E7 拷貝/μL 的 Cps 陽性對照(上步稀釋所得)，充分震蕩 1 分鐘，得 10E6 拷貝/μL 的陽性對照。
5. 換槍頭，從 6 號管中取 5 μL 溶液到 5 號管中，充分震蕩 1 分鐘，得 10E5拷貝/μL 的陽性對照。
6. 換槍頭，從 5 號管中取 5 μL 溶液到 4 號管中，重復(fù)上面的操作直到得到 6個稀釋度的陽性對照。
7. NC 管中不加任何陽性對照。
8. 從 1-6 號管中分別取 5 μL 和待測樣品一起進(jìn)行定量 PCR（見下步），每個樣品做 3 次重復(fù)。PCR 后得到每個陽性對照稀釋樣品的熒光 PCR Ct 值，并以之為縱軸，以濃度的對數(shù)值為橫軸，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。

運(yùn)輸及保存：低溫運(yùn)輸，-20℃保存，有效期一年。使用本試劑盒提供的陽性對照時，由于其濃度較高，一定要注意不要污染其他試劑和成分。在專門的區(qū)域操作。

其中引物與模板的正確結(jié)合是關(guān)鍵。引物與模板的結(jié)合及引物鏈的延伸是遵循堿基配對原則的。聚合酶合成反應(yīng)的忠實(shí)性及Taq DNA聚合酶耐高溫性，使反應(yīng)中模板與引物的結(jié)合(復(fù)性)可以在較高的溫度下進(jìn)行，結(jié)合的特異性大大增加，被擴(kuò)增的靶基因片段也就能保持很高的正確度。再通過選擇特異性和保守性高的靶基因區(qū)，其特異性程度就更高。

(2) 靈敏度高
PCR產(chǎn)物的生成量是以指數(shù)方式增加的，能將皮克(pg=10-12g)量級的起始待測模板擴(kuò)增到微克(ug=10-6g)水平。能從100萬個細(xì)胞中檢出一個靶細(xì)胞；在病毒的檢測中，PCR的靈敏度可達(dá)3個RFU(空斑形成單位)；在細(xì)菌學(xué)中zui小檢出率為3個細(xì)菌。
(3) 簡便、快速
PCR反應(yīng)用耐高溫的Taq DNA聚合酶，一次性地將反應(yīng)液加好后，即在DNA擴(kuò)增液和水浴鍋上進(jìn)行變性-退火-延伸反應(yīng)，一般在2～4 小時完成擴(kuò)增反應(yīng)。擴(kuò)增產(chǎn)物一般用電泳分析，不一定要用同位素，無放射性污染、易推廣。
(4) 對標(biāo)本的純度要求低
不需要分離病毒或細(xì)菌及培養(yǎng)細(xì)胞，DNA 粗制品及總RNA均可作為擴(kuò)增模板?？芍苯佑门R床標(biāo)本如血液、體腔液、洗嗽液、毛發(fā)、細(xì)胞、活PCR技術(shù)概論。
注意事項(xiàng)：
①加入試劑的順序應(yīng)一致，以保證所有反應(yīng)板孔溫育的時間一樣。
②使用干凈的塑料容器配置洗滌液。
③按照雞血紅蛋白(HB)ELISA檢測試劑盒說明書中標(biāo)明的時間、加液的量及順序進(jìn)行溫育操作。
④底物A應(yīng)揮發(fā)，避免長時間打開蓋子。底物B對光敏感，避免長時間暴露于光下。避免用手接觸，有毒。實(shí)驗(yàn)完成后應(yīng)立即讀取OD值。
⑤洗滌酶標(biāo)板時應(yīng)充分拍干，不要將吸水紙直接放入酶標(biāo)反應(yīng)孔中吸水。
⑥使用一次性的吸頭以免交叉污染，吸取終止液和底物A、B液時，避免使用帶金屬部分的加樣器。
⑦實(shí)驗(yàn)中不用的板條應(yīng)立即放回包裝袋中，密封保存，以免變質(zhì)。
⑧試劑應(yīng)按標(biāo)簽說明書儲存，使用前恢復(fù)到室溫。稀稀過后的標(biāo)準(zhǔn)品應(yīng)丟棄，不可保存。
⑨不用的其它試劑應(yīng)包裝好或蓋好。不同批號的試劑不要混用。保質(zhì)前使用。

以下是純綠青霉PCR檢測試劑盒說明書的相關(guān)產(chǎn)品：

801-D (人巨細(xì)胞性肺細(xì)胞)5×106cells/瓶×2

毒蕈堿型膽堿受體M1(CHRM1)重組蛋白英文名稱：Recombinant Cholinergic Receptor, Muscarinic 1 (CHRM1)

小單孢菌 Micromonospora sp.大豆慢生根瘤菌 Bradyrhizobium japonicum

G1(發(fā)綠色熒光的小鼠胚胎干細(xì)胞)5×106cells/瓶×2

小鼠樹突狀細(xì)胞肉瘤細(xì)胞英文名稱：DCS

Caki-2(人腎透細(xì)胞細(xì)胞)鏈霉菌 Streptomyces sp.

kasumi-1, 人白血病細(xì)胞株

鼠李糖桿菌 Lactobacillus rhamnosus平菇 Pleurotus ostreatus

L選擇素(SELL)重組蛋白英文名稱：Recombinant Selectin, Leukocyte (SELL)

卵黃多粘菌素B溶液/Egg-Yolk Polymyxin B Solution甘露醇卵黃多粘菌素瓊脂基礎(chǔ)配套試劑50毫升國產(chǎn)/進(jìn)口

UM-UC-3(人膀胱移行細(xì)胞)5×106cells/瓶×2

純綠青霉PCR檢測試劑盒說明書腺嘌呤 CAS 73-24-5 規(guī)格： HPLC≥98%;20mg 訂購|咨詢

白術(shù)內(nèi)酯Ⅱ;Atractylelid CAS 73069-14-4 規(guī)格： 20mg 訂購|咨詢

紫花杜鵑 CAS  規(guī)格： 2g 訂購|咨詢

南參 CAS  規(guī)格： 2g 訂購|咨詢

亞胺磷;純品型;標(biāo)準(zhǔn)品;有證書 CAS  規(guī)格： 0.1g 訂購|咨詢

L-谷氨酰胺 CAS  規(guī)格： 600mg 訂購|咨詢

獐牙菜苦甙 CAS 17388-39-5 規(guī)格： HPLC≥98%；20mg/vial 訂購|咨詢

箭藿苷A CAS 118525-35-2 規(guī)格： HPLC≥98%;5mg 訂購|咨詢

黃腐酚 CAS 6754-58-1 規(guī)格： 20mg 訂購|咨詢

肥皂草素;Saponin CAS 8047-15-2 規(guī)格： 20mg 訂購|咨詢

靈芝酸A CAS 81907-62-2 規(guī)格： HPLC≥95%;20mg 訂購|咨詢