化膿放線菌PCR檢測(cè)試劑盒說明書

注意事項(xiàng)：
①加入試劑的順序應(yīng)一致，以保證所有反應(yīng)板孔溫育的時(shí)間一樣。
②使用干凈的塑料容器配置洗滌液。
③按照雞血紅蛋白(HB)ELISA檢測(cè)試劑盒說明書中標(biāo)明的時(shí)間、加液的量及順序進(jìn)行溫育操作。
④底物A應(yīng)揮發(fā)，避免長(zhǎng)時(shí)間打開蓋子。底物B對(duì)光敏感，避免長(zhǎng)時(shí)間暴露于光下。避免用手接觸，有毒。實(shí)驗(yàn)完成后應(yīng)立即讀取OD值。
⑤洗滌酶標(biāo)板時(shí)應(yīng)充分拍干，不要將吸水紙直接放入酶標(biāo)反應(yīng)孔中吸水。
⑥使用一次性的吸頭以免交叉污染，吸取終止液和底物A、B液時(shí)，避免使用帶金屬部分的加樣器。
⑦實(shí)驗(yàn)中不用的板條應(yīng)立即放回包裝袋中，密封保存，以免變質(zhì)。
⑧試劑應(yīng)按標(biāo)簽說明書儲(chǔ)存，使用前恢復(fù)到室溫。稀稀過后的標(biāo)準(zhǔn)品應(yīng)丟棄，不可保存。
⑨不用的其它試劑應(yīng)包裝好或蓋好。不同批號(hào)的試劑不要混用。保質(zhì)前使用。

運(yùn)輸及保存：低溫運(yùn)輸，-20℃保存，有效期一年。使用本試劑盒提供的陽(yáng)性對(duì)照時(shí)，由于其濃度較高，一定要注意不要污染其他試劑和成分。在專門的區(qū)域操作。

其中引物與模板的正確結(jié)合是關(guān)鍵。引物與模板的結(jié)合及引物鏈的延伸是遵循堿基配對(duì)原則的。聚合酶合成反應(yīng)的忠實(shí)性及Taq DNA聚合酶耐高溫性，使反應(yīng)中模板與引物的結(jié)合(復(fù)性)可以在較高的溫度下進(jìn)行，結(jié)合的特異性大大增加，被擴(kuò)增的靶基因片段也就能保持很高的正確度。再通過選擇特異性和保守性高的靶基因區(qū)，其特異性程度就更高。
(2) 靈敏度高
PCR產(chǎn)物的生成量是以指數(shù)方式增加的，能將皮克(pg=10-12g)量級(jí)的起始待測(cè)模板擴(kuò)增到微克(ug=10-6g)水平。能從100萬(wàn)個(gè)細(xì)胞中檢出一個(gè)靶細(xì)胞；在病毒的檢測(cè)中，PCR的靈敏度可達(dá)3個(gè)RFU(空斑形成單位)；在細(xì)菌學(xué)中zui小檢出率為3個(gè)細(xì)菌。
(3) 簡(jiǎn)便、快速
PCR反應(yīng)用耐高溫的Taq DNA聚合酶，一次性地將反應(yīng)液加好后，即在DNA擴(kuò)增液和水浴鍋上進(jìn)行變性-退火-延伸反應(yīng)，一般在2～4 小時(shí)完成擴(kuò)增反應(yīng)。擴(kuò)增產(chǎn)物一般用電泳分析，不一定要用同位素，無(wú)放射性污染、易推廣。
(4) 對(duì)標(biāo)本的純度要求低
不需要分離病毒或細(xì)菌及培養(yǎng)細(xì)胞，DNA 粗制品及總RNA均可作為擴(kuò)增模板。可直接用臨床標(biāo)本如血液、體腔液、洗嗽液、毛發(fā)、細(xì)胞、活PCR技術(shù)概論。

使用方法:
一、樣品 DNA 的制備
用自選方法提取 Cps DNA。注意：DNA 純化方法是決定檢測(cè)靈敏度的關(guān)鍵因素。如果不能很好純化樣品 DNA，后面的 PCR 再靈敏也不能提高整體檢測(cè)靈敏度。
二、制備 Cps 標(biāo)準(zhǔn)曲線（以 10-10E6 這 6 個(gè) 10 倍稀釋度為例。由于標(biāo)準(zhǔn)品濃度非常高，因此下列稀釋操作一定要在獨(dú)立的區(qū)域進(jìn)行，千萬(wàn)不能污染樣品或本試劑盒的其他成分）。為增加產(chǎn)品穩(wěn)定性和避免擴(kuò)散傳染性病原，本產(chǎn)品不提供活體病毒做陽(yáng)性對(duì)照，只提供沒有傳染性的、可以直接使用的 DN**段作為陽(yáng)性對(duì)照。
1. 標(biāo)記 6 個(gè)離心管，分別為 6，5，4，3，2 和 1 號(hào)。
2. 用帶芯槍頭分別加入 45 μL 超純水（用帶芯槍頭，下同）。
3. 先將本試劑盒提供的陽(yáng)性對(duì)照用 TE 緩沖液或超純水 10 倍梯度稀釋到10E7 拷貝/μL（注：請(qǐng)不要將本試劑盒提供的標(biāo)準(zhǔn)品一次性稀釋至 10E7拷貝/μL，建議每次稀釋 10 倍，梯度稀釋至 10E7 拷貝/μL）。
4. 在 6 號(hào)管中加入 5 μL 10E7 拷貝/μL 的 Cps 陽(yáng)性對(duì)照(上步稀釋所得)，充分震蕩 1 分鐘，得 10E6 拷貝/μL 的陽(yáng)性對(duì)照。
5. 換槍頭，從 6 號(hào)管中取 5 μL 溶液到 5 號(hào)管中，充分震蕩 1 分鐘，得 10E5拷貝/μL 的陽(yáng)性對(duì)照。
6. 換槍頭，從 5 號(hào)管中取 5 μL 溶液到 4 號(hào)管中，重復(fù)上面的操作直到得到 6個(gè)稀釋度的陽(yáng)性對(duì)照。
7. NC 管中不加任何陽(yáng)性對(duì)照。
8. 從 1-6 號(hào)管中分別取 5 μL 和待測(cè)樣品一起進(jìn)行定量 PCR（見下步），每個(gè)樣品做 3 次重復(fù)。PCR 后得到每個(gè)陽(yáng)性對(duì)照稀釋樣品的熒光 PCR Ct 值，并以之為縱軸，以濃度的對(duì)數(shù)值為橫軸，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。

以下是化膿放線菌PCR檢測(cè)試劑盒說明書的相關(guān)產(chǎn)品：

沙星 英文名稱：Antofloxacin 規(guī)格：：100mg 保存：：-20℃，避光

左氧氟沙星 英文名稱：Levofloxacin 規(guī)格：：100mg 保存：：-20℃，避光

氧氟沙星 英文名稱：Ofloxacin 規(guī)格：：100mg 保存：：-20℃，避光

依諾沙星 英文名稱：Enoxacin 規(guī)格：：200mg 保存：：-20℃，避光

洛美沙星 英文名稱：Lomefloxacin 規(guī)格：：100mg 保存：：-20℃，避光

環(huán)丙沙星 英文名稱：Ciprofloxacin 規(guī)格：：100mg 保存：：-20℃，避光

諾氟沙星 英文名稱：Norfloxacin 規(guī)格：：200mg 保存：：-20℃，避光

辛烷磺酸鈉 英文名稱：Octane sulfonic acid sodium salt 規(guī)格：：5g 保存：：-20℃，避光

2-苯乙酰胺 英文名稱：2- benzene acetamide 規(guī)格：：65mg 保存：：-20℃，避光

3-乙氧基－4－羥基苯甲醛 英文名稱：3- ethoxy - 4 - hydroxy benzaldehyde 規(guī)格：：100mg 保存：：-20℃，避光

磺酸鈉 英文名稱：Hexane sulfonic acid sodium salt 規(guī)格：：5g 保存：：-20℃，避光

磺酸鈉 英文名稱：Pentane sulfonic acid sodium salt 規(guī)格：：5g 保存：：-20℃，避光

咪唑試劑 英文名稱：Imidazole reagent 規(guī)格：：100克 保存：：-20℃，避光

青霉素酶（10支/次購(gòu)買量） 英文名稱：Penicillinase (10 / times purchased) 規(guī)格：：2ml/支 保存：：-20℃，避光

化膿放線菌PCR檢測(cè)試劑盒說明書鯉春病毒血癥病毒探針法熒光定量RT-PCR試劑盒Spring Viraemia of Carp Virus(SVCV)

圣路易斯腦炎病毒探針法熒光定量RT-PCR試劑盒St.Louis Encephalitis Virus(SLEV)

葡萄狀穗霉屬通用探針法熒光定量PCR試劑盒Stachybotrys spp.

阿爾萊特葡萄球菌探針法熒光定量PCR試劑盒Staphylococcus arlettae

金黃色葡萄球菌探針法熒光定量PCR試劑盒Staphylococcus aureus

Acidovorax avenae ssp. cattleyae蘭花褐斑病菌PCR試劑盒

Acidovorax avenae ssp. citrulli瓜類細(xì)菌性果斑病菌PCR試劑盒性

Acidovorax konjaci魔芋細(xì)菌性葉斑病菌PCR試劑盒

African Cassava Mosaic Virus(ACMV)非洲木薯花葉病毒PCR試劑盒

Agrobacterium rhizogenes毛根農(nóng)桿菌PCR試劑盒

Agrobacterium rubi懸鉤子農(nóng)桿菌PCR試劑盒

Agrobacterium tumefaciens根癌土壤桿菌PCR試劑盒

Albugo tragopogi向日葵白銹病菌PCR試劑盒