食品T2毒素殘留診斷試劑盒（ELISA方法學）
1 原理及用途
T2毒素（T2）是由多種鐮刀菌產生的一種霉菌毒素。主要污染小麥、大麥、玉米等糧食作物及其制品，對人類健康及畜牧業(yè)構成了較大危害。T2毒素主要影響血液，肝臟，腎臟，胰腺肌肉及淋巴細胞的功能，T2毒素中毒后的一般臨床癥狀為厭食、嘔吐、腹瀉、生長停滯、繁殖和神經機能障礙等。使用T2毒素試劑盒則能夠快速而準確的分析樣品中T2毒素殘留。
本試劑盒采用一步競爭ELISA方法檢測玉米、大米、豆類、花生、燕麥、飼料等樣本中的T2毒素，試劑盒由預包被偶聯抗原的酶標板、辣根酶標記物、抗體、標準品及其他配套試劑組成。檢測時，酶標板微孔條上預包被T2毒素抗原與樣本中T2毒素競爭抗T2毒素抗體(抗體工作液)，同時抗T2毒素抗體與酶標二抗（酶標記物）相結合，經TMB底物顯色，樣本吸光值與其含有的T2毒素成負相關，與標準曲線比較再乘以其對應的稀釋倍數，即可得出樣品中T2毒素的含量。
食品T2毒素殘留診斷試劑盒（ELISA方法學）
2 技術指標
2.1 試劑盒靈敏度：0.05ppb(ng/ml)
2.2 反應模式：25℃，30min～15min
2.3 檢測下限：
花生、玉米、燕麥、大豆、飼料等……………6ppb
2.5 樣本回收率：
花生、玉米、燕麥、大豆、飼料等……………110±15%
5.3.1 花生、玉米、燕麥、大豆、飼料等樣品處理方法
1）取1g粉碎樣品，加入20ml樣品提取液；
2）劇烈振蕩5min；
3）室溫4000轉/分離心5分鐘（或用定量分析濾紙過濾）；
4）取上清液，用蒸餾水或去離子水按1∶5（即：取1份上清液+5份去離子水）比例稀釋；
5）取50μl進行分析。
稀釋倍數：120 檢測下限：6ppb
6 酶聯免疫試驗步驟
將所需試劑從4℃冷藏環(huán)境中取出，置于室溫平衡30min以上, 洗滌液冷藏時可能會有結晶需恢復到室溫以充分溶解，每種液體試劑使用前均須搖勻。取出需要數量的微孔板及框架，將不用的微孔板放入自封袋，保存于2-8℃。
6.1 編 號：將樣本和標準品對應微孔按序編號，每個樣本和標準品做2孔平行，并記錄標準孔和樣本孔所在的位置。
6.2 加樣反應：加標準品或樣本50µl/孔到各自的微孔中，然后加酶標記物50µl/孔，再加入50µl/孔的抗體工作液，用蓋板膜封板，輕輕振蕩5秒混勻，25℃反應30分鐘。
6.3 洗 滌：小心揭開蓋板膜，將孔內液體甩干，用工作洗滌液250µl/孔充分洗滌5次，每次間隔30秒，用吸水紙拍干（拍干后未被清除的氣泡可用干凈的槍頭刺破）。
6.4 顯 色：每孔加入底物液A 50µl，再加底物液B 50µl，輕輕振蕩5秒混勻，25℃避光顯色15分鐘（若藍色過淺，可適當延長反應時間）。
6.5 終 止：每孔加入終止液50µl，輕輕振蕩混勻，終止反應。
6.6 測吸光值：用酶標儀于450nm處測定每孔吸光度值（建議用雙波長450/630nm）。測定應在終止反應后10分鐘內完成。
7 結果分析
7.1 百分吸光率的計算
標準液或樣本的百分吸光率等于標準液或樣本的百分吸光度值的平均值（雙孔）除以第一個標準液（0ppb）的吸光度值，再乘以100%，即
百分吸光度值（%）＝ A ×100%A0
A—標準溶液或樣本溶液的平均吸光度值
A0—0ppb標準溶液的平均吸光度值
7.2 標準曲線的繪制與計算
以標準液百分吸光率為縱坐標，對應的標準液濃度（ppb）的對數為橫坐標，繪制標準液的半對數曲線圖。將樣本的百分吸光率代入標準曲線中，從標準曲線上讀出樣本所對應的濃度，乘以其對應的稀釋倍數即為樣本中待測物的實際濃度。
若利用試劑盒專業(yè)分析軟件進行計算，更便于大量樣本的準確、快速分析。
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