上?，F(xiàn)貨人轉(zhuǎn)化生長因子受體β1（TGF-β1）檢測試劑盒

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上?，F(xiàn)貨人轉(zhuǎn)化生長因子受體β1（TGF-β1）檢測試劑盒需要而未提供的材料
4.1 設備
4.1.1波長450nm酶標儀。 
4.1.2粉碎機。
4.1.3量筒。
4.1.4振蕩器。
4.1.5漏斗。
4.1.6Whatman 或相當?shù)臑V紙。
4.1.7微量移液器。
4.2 試劑
4.2.1去離子水或蒸餾水。
4.2.2 甲醇。
5 貯存
5.1 試劑盒貯存于2~8℃，切勿冷凍
5.2 未用完的微孔板應該密封干燥保存
6 注意事項
6.1 使用試劑盒前請仔細閱讀說明書。
6.2 不要使用過期試劑盒。
6.3 試劑盒使用前，將試劑恢復室溫（25±2℃），建議少回溫2小時。
6.4 標準品中含有本產(chǎn)品試劑，使用時應特別注意，操作時應帶手套。
6.5 終止液中含有硫酸，使用時防止灼傷皮膚及腐蝕衣物。
6.6 不同標準品、樣品所用吸頭不能混用，否則會影響試驗結(jié)果。
6.7 不同批號試劑盒中的試劑不得混用；不同標準品、樣品所用吸頭不得混用，否則會影響實驗結(jié)果。
6.8 稀釋樣本時必須用本試劑盒中的樣本稀釋液，否則會影響實驗結(jié)果
6.9 混合試劑時應避免起泡。
7 工作液準備
7.1 AFB1標準品溶液：0ng/ml,0.1ng/ml ,0.3 ng/ml,0.9 ng/ml,2.7 ng/ml,8.1ng/ml
7.2 濃縮洗滌液：用蒸餾水按1:20(1+19)稀釋備用
7.3 樣本稀釋液：用蒸餾水按1:10(1+9)稀釋備用
7.3 顯色劑：已備用，避免光線直照
7.4 反應終止液：已備用
8 樣品處理程序（樣品在提取過程中，要嚴格按說明書操作，提取過程中應準確稀釋，否則會出現(xiàn)結(jié)果不準確，樣品應當保存在陰涼避光之處及冷藏保存）
8.1取10g粉碎的樣品，加 20ml 70%甲醇溶液
8.2強力振蕩3分鐘
8.3用Whatman 濾紙過濾
8.4取100μl處理后的樣品，加入400μl樣本稀釋液
8.5取50μl稀釋液進行分析（稀釋倍數(shù)10）
9 酶免分析步驟
9.1 實驗須知
9.1.1 實驗開始前請將所有試劑于盒外充分恢復室溫（25±2℃），時間約2小時?；販厥覝兀?5±2℃）后再取出微孔條，多余的微孔條重新密封立即于2~8℃干燥保存
注：一定保證回溫充分，否則影響檢測的精確度和準確度。
9.1.2 使用后請立即將試劑放回2~8℃保存
9.1.3 請不要改變分析程序
9.1.4 請使用精確的微量移液器
9.1.5 操作一旦開始，請不要中斷任何程序
9.1.6 ELISA結(jié)果的可重復性極大程度的取決于操作程序，請嚴格按照要求操作
9.1.7 為避免交叉污染，每個標準品和樣品均應使用不同的吸頭加樣
9.1.8 加樣時請勿讓吸頭接觸微孔中的溶液或內(nèi)表面
9.2 分析步驟
9.2.1 預先進行編號，標記B0、標準品和樣品的位置，推薦進行雙孔檢測
9.2.2 取所需數(shù)量的微孔（微孔條可拆），將多余板條重新密封并立即放回2~8℃保存
9.2.3 樣品稀釋液（10×）、濃縮洗滌液（20×）稀釋成工作液(蒸餾水或去離子水稀釋)
9.2.4 在B0孔中加入50μl0.0 ng/ ml標準品溶液
9.2.5 在各標準孔中加入50μl的標準品溶液
9.2.6 在各樣品孔中加入50μl樣品溶液
9.2.7 在所有孔中加入50μl的抗本產(chǎn)品抗體酶結(jié)合物
9.2.8 輕輕晃動反應板幾秒鐘。 
9.3 37℃溫浴30min （溫浴過程中不時輕拍反應板，可以減少雙孔誤差）
9.3.1 甩掉孔中液體，用洗液洗滌微孔板5次，zui后一次應在吸水紙上拍打以*除去孔中液體。
9.4 反應
9.4.1 洗滌程序完成后，立即用微量移液器在每個微孔中先加入50μl顯色液A，再加 50μl顯色液B；輕微晃動反應板使之*混勻
9.4.2 37℃溫浴10min
9.4.3 每孔中加入50μl終止液，混勻
9.4.4 在450nm下檢測吸光度，結(jié)果在5min內(nèi)讀取。

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