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ELISA試劑盒操作步驟
ELISA試劑盒使用前,將所有試劑充分混勻.不要使液體產(chǎn)生大量的泡沫,以免加樣時(shí)加入大量的氣泡,產(chǎn)生加樣上的誤差.
根據(jù)待測(cè)樣品數(shù)量加上標(biāo)準(zhǔn)品的數(shù)量決定所需的板條數(shù).每個(gè)標(biāo)準(zhǔn)品和空白孔建議做復(fù)孔.每個(gè)樣品根據(jù)自己的數(shù)量來(lái)定,能使用復(fù)孔的盡量做復(fù)孔.標(biāo)本用標(biāo)本稀釋液1：1稀釋后加入50ul于反應(yīng)孔內(nèi).
加入稀釋好后的標(biāo)準(zhǔn)品50ul于反應(yīng)孔、加入待測(cè)樣品50ul于反應(yīng)孔內(nèi).立即加入50ul的生物素標(biāo)記的抗體.蓋上膜板,輕輕振蕩混勻,37℃溫育1小時(shí).
甩去孔內(nèi)液體,每孔加滿洗滌液,振蕩30秒,甩去洗滌液,用吸水紙拍干.重復(fù)此操作3次.如果用洗板機(jī)洗滌,洗滌次數(shù)增加一次.
每孔加入80ul的親和鏈酶素-HRP,輕輕振蕩混勻,37℃溫育30分鐘.
甩去孔內(nèi)液體,每孔加滿洗滌液,振蕩30秒,甩去洗滌液,用吸水紙拍干.重復(fù)此操作3次.如果用洗板機(jī)洗滌,洗滌次數(shù)增加一次.
每孔加入底物A、B各50ul,輕輕振蕩混勻,37℃溫育10分鐘.避免光照.
取出酶標(biāo)板,迅速加入50ul終止液,加入終止液后應(yīng)立即測(cè)定結(jié)果.
在450nm波長(zhǎng)處測(cè)定各孔的OD值.
人烏頭酸酶2(ACO-2)檢測(cè)試劑盒ELISA操作步驟
酶聯(lián)免疫吸附實(shí)驗(yàn)材料,試劑,溶液
1．酶標(biāo)板,100μltip頭,1mlEp管,濕盒
2．包被稀釋液（0.05mol/L碳酸鈉-碳酸氫鈉buffer,pH9.6）
碳酸鈉0.15g,碳酸氫鈉0.29g,疊氮鈉0.02g,加雙蒸水100ml,調(diào)pH9.6
3.封閉液(5%小牛血清/PBS溶液)
小牛血清5ml,1*PBS(pH7.4)95ml
4.洗滌液(PBST,pH7.4)
NaCl0.8g,KH2PO40.02g,Na2HPO4.12H2O0.29g,KCl0.02g,Tween200.05ml,疊氮鈉0.01g,加雙蒸水100ml,調(diào)pH7.4
5.樣本稀釋液(PBS,pH7.4)
NaCl0.8g,KH2PO40.02g,Na2HPO4.12H2O0.29g,KCl0.02g,疊氮鈉0.01g,加雙蒸水100ml,調(diào)pH7.4
6.酶標(biāo)第2抗體(羊抗兔)稀釋范圍1:5,000-1:100,000
7.底物液(TMB-過(guò)氧化氫尿素溶液)
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